一、研究背景化疗是免疫性疾病和肿瘤治疗中的一种重要手段,因其疗效确切,故临床应用广泛。但化疗药物有一定的细胞毒作用,对靶细胞选择性较差,因此在杀灭病变细胞的同时对正常组织和细胞也有不同程度的损伤。对于女性癌症患者,化疗可能会影响她们未来的生殖能力,给患者带来巨大的痛苦,常伴有闭经、不孕及更年期症状,未老先衰,严重地影响了患者的身心健康甚至家庭的稳定。保持青春,抵抗衰老是21世纪重要的健康话题,如何防治卵巢早衰,恢复患者的卵巢功能,提高生活质量,是国内外亟待研究和解决的问题。二、研究目的：观察顺铂对小鼠卵巢颗粒细胞芳香化酶活性及表达的影响,探讨顺铂对与芳香化酶表达有关的Smad信号转导途径的影响；用四物合剂干预顺铂作用小鼠和顺铂作用的颗粒细胞,观察其是否可改善顺铂对芳香化酶活性与表达的影响,以明确其作用效果,并进一步观察卵巢颗粒细胞Smad信号转导途径中几种蛋白表达的改变,揭示四物合剂对顺铂作用小鼠卵巢颗粒细胞芳香化酶表达的干预机制,为临床利用中医药防治化疗性卵巢早衰提供有力的实验依据。三、研究方法：通过体内、体外实验,分别构建动物实验和细胞研究模型,运用血清学指标、放免技术和免疫组织化学技术等方法,研究CDDP对鼠卵巢颗粒细胞芳香化酶活性和表达的影响及四物合剂的干预效果和机制。四、研究结果：1.四物合剂在顺铂作用过程中使用的可行性观察本实验通过顺铂腹腔注射给药,对小鼠机体形成化疗性损伤,从一般生命指征、肝肾功能损伤和骨髓抑制作用等方面观察顺铂的损伤效果和四物合剂的干预效果。结果表明,顺铂使小鼠体重下降,各脏器质量和系数发生改变,影响血清中ALT、UREA、UQ的含量,肝脏中几种抗氧化成份水平下降,肝线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ活性改变；四物合剂对上述损伤性改变均有缓解作用,表明四物合剂可在多方位改善化疗损伤。2.四物合剂对顺铂作用小鼠卵巢的保护作用顺铂腹腔注射给药后小鼠动情周期紊乱,停滞于动情前期,卵巢系数降低,雌激素分泌减少,评价卵巢储备力的参数FSH/LH升高等现象均可表明顺铂使小鼠的卵巢功能下降,形态学亦观察到闭锁卵泡数量增加,生长卵泡和成熟卵泡数量明显减少。四物合剂能改善顺铂诱导的卵巢功能损伤,这种改善体现在多方面：动情周期、卵巢系数、雌孕激素的分泌功能、FSH/LH(卵巢储备力)和各级卵泡的发育并减少闭锁卵泡的形成。3.顺铂作用后卵巢颗粒细胞计数结果评价方法的建立本实验分选3个时间段,用MTT和CCK-8两种方法对CDDP作用后的卵巢颗粒细胞进行计数,通过对比吸光度值变化、吸光度比值变化,表明两种计数方法结合使用,配以吸光度值比值变化,可以更准确地反映细胞增殖情况。4.四物合剂对顺铂体外作用卵巢颗粒细胞增殖与分泌的影响经CDDP作用后,体外培养卵巢颗粒细胞计数水平低于对照组,且雌激素、孕激素水平下降；加入四物合剂药理血清后,使计数水平恢复,且雌、孕激素水平升高。5.四物合剂对顺铂损伤小鼠卵巢颗粒细胞芳香化酶及信号调控蛋白表达的作用顺铂腹腔注射给药后,小鼠的卵巢颗粒细胞内P-Smad2/3表达降低,相应受其调控的芳香化酶表达亦下降；给予四物合剂后,P-Smad2/3表达明显升高,芳香化酶表达水平基本维持在生理组水平。五、研究结论：通过体内、体外实验表明CDDP可诱导小鼠卵巢颗粒细胞内芳香化酶及调控蛋白P-Smad2/3表达降低,且对小鼠卵巢形态具有损伤作用和对颗粒细胞有抑制增殖作用。四物合剂通过升高P-Smad2/3表达以维持芳香化酶表达水平的正常,维持卵巢的正常分泌功能,对卵巢形态和颗粒细胞增殖亦有保护性作用；且四物合剂对化疗损伤具多方位改善作用。综合上述结果表明四物合剂对于临床防治化疗性卵巢早衰中具有一定的可行性。