苹果组培苗不定根发生过程中mRNA差异显示表达及生根移栽体系优化研究

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试验以苹果矮化砧木组培苗M26为试材,应用mRNA差异显示技术,初步建立了苹果矮化砧木生根过程中的相关基因筛选体系。同时以M26为试材,建立了蛭石替代琼脂生根体系。以苹果组培苗SH28、SH29为试材研究了生根组培苗移栽过程中环境因素对幼苗生长的影响,主要研究结果如下:1、苹果组培苗mRNA差异显示PCR优化后结果:退火温度为45℃,20μL PCR体系为:稀释10倍的模板cDNA2μL,Taq酶2.0U,上游随机引物和下游锚定引物1:1配比,浓度分别为2.5μmol·L-1,dNTPs加入量为125μmol L-1。采用优化后的PCR程序及体系,用8个上游随机引物和3个下游锚定引物共计24对引物对样品进行PCR扩增,有11对引物可扩增出条带,其中9对引物得到了较好的扩增结果,主带清晰,扩增的带型差异明显,共计扩增出41条差异基因,其中38个特异表达基因,2个在诱导后上调表达基因,1个在诱导后下降表达的基因。2、将组培苗在含有0.6mg·L-1IBA的琼脂生根培养基中诱导7d~9d后,扦插于蛭石培养基中,生根率均达94%以上,显著高于琼脂培养基处理,且侧根数量显著大于诱导11d~13d和琼脂培养基处理。蛭石培养基中添加20g·L-1蔗糖,生根率达95.18%,生根条数、侧根数和根长显著优于未添加蔗糖处理。基质水分含量也明显影响生根,50%~90%水分条件下,生根率均在96%以上,显著高于琼脂培养基,生根条数各处理间无差异,侧根数以50%~60%含水量最高,达6.69和6.46,显著高于其他处理,根长以琼脂培养基最大,为2.89cm。经100mg·L-1IBA速蘸处理后,扦插于含有20g·L-1蔗糖、60%含水量的蛭石培养基中,生根率显著提高,达到100%,生根数目、根长、侧根数目得到了大幅度提高,根系质量得到明显的改善。3、采用建立的蛭石生根培养体系,进行组培苗瓶外生根研究。结果表明组培苗在含有0.6mg·L-1IBA的琼脂生根培养基中诱导4d,移至温室炼苗5d后直接扦插于蛭石基质中,4~5d浇灌一次不含蔗糖的1/2MS营养液,组培苗生根率、生根条数和根长与瓶内生根培养无明显差异,但侧根数目显著提高,同时大大缩短了育苗时间。4、生根组培苗在培养室培养8d,移至温室锻炼17d后移栽,组培苗生长量明显增加,为最佳时间组合。组培苗在培养室培养8d,温室锻炼11d、17d、25d三个处理中,也以17d为最佳炼苗时间,移栽组培苗株高、叶片数、单株叶面积和单叶片面积均有明显提高。以草炭土与蛭石1:2或1:1配比为移栽基质,组培苗移栽成活率较高,分别达90.77%和88.24%,显著高于草炭土与蛭石2:1配比;同时草炭土与蛭石1:1配比处理还可有效提高幼苗生长量。草炭土经灭菌处理后,组培苗单株叶面积及单叶片面积显著增加,苗木生长更健壮。基质中添加0.1%枯草芽孢杆菌对幼苗生长量未见显著作用。浇灌供试营养液40d后可见移栽幼苗生长量显著大于对照,综合效果以MS营养液促苗效果最佳。
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