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细胞自噬和胞吞是细胞进行正常生命活动所必须的生理程序,其活性受到诸多因素的影响。生长因子作为哺乳动物体内的重要调节因子,可通过多种作用方式参与动物的卵泡发育、卵母细胞成熟及早期胚胎发育,但其对哺乳动物生殖相关细胞自噬及胞吞程序调控的相关研究目前仍十分少见。牦牛(Bos grunniens)作为高原地区重要经济畜种,其季节性发情、繁殖力低下的特征是牧区经济发展困难的主要原因之一,卵丘细胞紧紧围绕卵母细胞生长,它自身的自噬和胞吞活动对卵泡发育及卵母细胞成熟具有重要作用。本研究选取牦牛卵丘细胞为研究对象,探究表皮生长因子(Epidermal gr owth factor,EGF)和胰岛素样生长因子-1(Insulin-like growth factor,IGF-1)对其自噬和胞吞活动的影响。使用浓度为0(对照组)、50、100、150、200 ng/mL的EGF和适宜浓度(10μmol/L)表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)抑制剂Gefitinib以及浓度为0(对照组)、50、100、150、200 ng/mL的IGF-1作用于牦牛卵丘细胞,提取细胞总RNA和总蛋白。利用qRT-PCR及Western-blot等技术分别测定各浓度下自噬相关基因5(Autophagy related gene 5,Atg5)、Bcl-2同源结构域蛋白(Bcl-2homologous domain protein,Beclin1)、微管相关蛋白轻链3(Microtubule-associated protein light chain 3,LC3)以及胞吞相关蛋白小窝蛋白1(Caveolin1,Cav1)、小窝蛋白2(Caveolin2,Cav2)的相对表达量,并结合免疫荧光技术对5种蛋白在细胞的表达定位进行比较分析。结果如下:1)成功体外培养牦牛卵丘细胞,经鉴定,自噬相关蛋白Atg5、Beclin1、LC3及胞吞相关蛋白Cav1、Cav2在牦牛卵丘细胞均有表达,且主要分布在胞质中。2)经不同浓度EGF处理的牦牛卵丘细胞,自噬基因Atg5表达量较对照组(0 ng/mL)下降,且Atg5蛋白和Atg5-Atg12复合物表达量与EGF浓度负相关,各处理组表达量均显著低于对照组(0 ng/mL)(P<0.05),自噬基因Beclin1、LC3及蛋白Beclin1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达先下降后回升,均在100 ng/mL处达到最低(P<0.05);Cav1、Cav2 mRNA与蛋白的相对表达均与EGF浓度正相关,在200 ng/mL处最高(P<0.05)。3)抑制EGFR后,LC3 mRNA和蛋白相对表达量均显著增高(P<0.05),其他自噬基因及蛋白表达无显著变化(P>0.05);Cav1、Cav2 mRNA和蛋白相对表达量均显著升高(P<0.05)。4)经不同浓度IGF-1处理的牦牛卵丘细胞,自噬相关基因Atg5、Beclin1、LC3及蛋白Atg5、Atg5-Atg12、Beclin1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ相对表达量均先下降而后上升,在100 ng/mL处理组均达到最低,与其他处理组差异显著(P<0.05);Cav1和Cav2 mRNA和蛋白相对表达量均与IGF-1呈浓度依赖,随IGF-1浓度增大,表达量先下降后回升。综上,体外培养牦牛卵丘细胞时添加EGF和IGF-1均可影响自噬及胞吞相关基因和蛋白的表达,且作用效果与EGF和IGF-1浓度相关;两种生长因子均可抑制牦牛卵丘细胞自噬,100 ng/mL为最佳作用浓度;胞吞相关小窝蛋白Cav1、Cav2表达量与EGF和IGF-1浓度呈现一定的正相关关系,两种生长因子均在作用浓度为150 ng/mL时对Cav1、Cav2表达均有很好的促进作用。EGF和IGF-1参与牦牛卵丘细胞自噬及胞吞的生物学功能调控,以上研究结果为进一步研究生长因子参与动物生殖相关细胞自噬与胞吞作用,及其对卵母细胞成熟和胚胎发育的作用机制提供理论依据。