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目的:探讨姜黄素(Curcumin,CUR)在一定剂量下对丙烯酰胺(acrylamide,ACR)诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)凋亡的影响及其可能的机制,为ACR中毒防治提供新的思路和线索。方法:首先通过MTT实验确定ACR染毒剂量和CUR干预剂量。细胞实验分为5组,分别为对照组,ACR组及3个CUR预处理组。ACR组加入最终浓度为2 mmol/L ACR作用24h,CUR干预方式为加入终浓度为1、5、10μmol/L CUR预处理细胞2 h,随后吸除CUR再加入2 mmol/L ACR作用24 h。NF-κB信号通路抑制剂实验的干预方式为,BAY11-7082先预处理2 h,去除BAY11-7082,再加入ACR染毒24 h。MTT法检测细胞存活率;相差显微镜观察细胞形态。DCFH-DA荧光探针法检测细胞内ROS生成;酶标法检测细胞MDA水平、GSH含量和GSH-Px活力;Western blot法测定胞浆、胞核NF-kB蛋白表达,以及Bax、Bcl-2,和P53蛋白表达;流式细胞术测定细胞凋亡率。结果:(1)细胞存活率:a:与对照组相比,在0.125-8 mmol/L不同剂量ACR处理24 h后,0.125、0.25、0.5、1 mmol/L ACR处理组均未引起细胞存活率的显著改变,而2、4、8 mmol/L ACR处理组细胞数目明显减少,神经突起收缩,贴壁能力降低,胞体呈球状,且细胞存活率显著降低(P<0.001),呈现良好的剂量效应关系。因此,在后续实验中ACR剂量选择为2 mmol/L。b:与对照组相比,不同剂量CUR干预2 h后,除80μmol/L CUR预处理组细胞数目减少,且细胞存活率显著下降(P<0.001)外,1-40μmol/L CUR预处理组细胞存活率均无明显下降。因此,在后续实验中,CUR剂量选择为1μmol/L,5μmol/L,10μmol/L。c:与ACR处理组相比,5μmol/L CUR和10μmol/L CUR预处理组细胞存活率显著上升(P<0.001)。提示CUR可以减轻ACR对细胞存活率的影响。(2)氧化应激:a:与对照组相比,ACR处理组MDA和ROS水平均显著增加(P<0.001);GSH含量显著降低(P<0.001),提示ACR可引起细胞产生氧化应激反应。b:与ACR处理组相比,5μmol/L和10μmol/L CUR预处理组MDA水平和ROS水平显著下降(P<0.001),GSH含量显著上升(P<0.001)。提示CUR可降低ACR引起细胞的氧化应激水平。(3)对凋亡的影响:a:流式细胞术和western blot的结果显示,与对照组相比,ACR组细胞凋亡率显著上升(P<0.001);P53和Bax蛋白表达显著增加(P<0.001);Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.001)。b:流式细胞术和western blot结果显示,与ACR处理组相比,1μmol/L和5μmol/L CUR预处理组细胞凋亡率显著下降(P<0.01);1μmol/L,5μmol/L和10μmol/L CUR预处理组Bax蛋白表达显著降低(P<0.001);5μmol/L和10μmol/L CUR预处理组Bcl-2蛋白表达显著增高;5μmol/L CUR预处理组P53蛋白表达显著降低。提示CUR可以减少ACR导致的细胞凋亡。(4)对NF-κB的影响:Western blot结果显示,与对照组相比,NF-κB蛋白表达水平显著上升;与ACR处理组相比,1μmol/L,5μmol/L和10μmol/L CUR预处理组胞NF-κB蛋白表达显著降低(P<0.001)。(5)NF-κB通路在细胞凋亡中的作用:a:Western blot结果显示,与对照组相比,ACR处理组Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.001),Bax蛋白表达显著增加(P<0.001);b:与ACR处理组相比,NF-κB通路特异抑制剂BAY11-7082预处理组Bax蛋白表达显著增加(P<0.001);Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.001)且呈剂量-效应关系;c:流式细胞术结果显示,与ACR处理组相比,BAY11-7082预处理组细胞凋亡率显著增加。提示NF-κB通路的抑制加剧了ACR诱导SH-SY5Y细胞凋亡的发生。结论:ACR以一定剂量(2 mmol/L)作用24 h产生明显的细胞毒性,表现为细胞存活率下降、细胞出现氧化应激以及细胞凋亡;CUR在1-10μmol/L可以通过减轻氧化应激抑制细胞凋亡;NF-κB可以抑制ACR诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,对神经细胞有保护作用。