外源性枯草芽孢杆菌在水体和斑马鱼肠道的定植情况及其对所处环境菌群的影响

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益生菌的适应性对其在养殖水体和鱼类肠道中的存活和定植以及生物调控功能的发挥具有重要意义。芽孢杆菌是水产养殖中被广泛应用的益生菌,然而它在养殖水体和鱼类肠道中的生存动态以及影响仍然不清楚。在这项研究中,我们采用带有绿色荧光蛋白标记基因的载体pGFP315导入来自草鱼肠道的枯草芽孢杆菌并筛选出实验用菌Bst51,先将重组细菌投入设计好的实验养殖水体中并进行定时取样测定各项水质指标,然后采用细菌计数、荧光显微镜观察、聚合酶链式反应-变性凝胶梯度电泳等方法探究外源性枯草芽孢杆菌在水体和斑马鱼肠道中的定植情况以及对其中菌群的影响。结果表明:  (1)通过构建带有绿色荧光蛋白标记技术以及进一步的筛选和驯化,我们得到了用于本次实验的枯草芽孢杆菌重组菌株Bst51;  (2)通过测定溶氧量(DO)、 pH、总氮、总磷、硝态氮、亚硝态氮和氨氮等水质指标并进行显著性分析发现,本研究所获得的枯草芽孢杆菌Bst51菌株在改善水质方面效果并不明显,除了长期影响总氮指标和短期内影响DO值和亚硝态氮指标外对其余指标并无显著影响。  (3)细菌计数和斑马鱼消化道各部分样品切片的荧光显微镜观察结果显示,在只施用一次时,水体中Bst51的浓度下降到初始浓度的1/10并于24h后保持稳定,证明Bst51菌株在浓度高于103 CFU/mL时能在养殖水体中存活。经过一次饲喂后斑马鱼肠道中Bst51细胞的浓度有小幅下降并最终保持在5×106 CFU/g左右,证明Bst51细胞在浓度高于109 CFU/mL时能在斑马鱼肠道中生存定植。  (4)通过PCR-DGGE技术,我们认为,施用Bst51后,水中细菌群落变得更加丰富,有利于形成稳定的细菌群落,维持水体微生态的稳定;在低剂量饲喂Bst51时,其对肠道微生态的影响很小;高剂量饲喂Bst51时,其先打破肠道细菌群落的平衡,而后肠道微生态系统又逐渐回到之前的平衡。
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