【摘 要】
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古菌是一种在进化上不同于真细菌和真核生物的第三域生命形式。最近的研究发现古菌的DNA复制系统与真核生物非常相似,其中极端嗜热古菌已经成为研究高等真核生物复制调控机制
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古菌是一种在进化上不同于真细菌和真核生物的第三域生命形式。最近的研究发现古菌的DNA复制系统与真核生物非常相似,其中极端嗜热古菌已经成为研究高等真核生物复制调控机制的模式生物。本论文以古菌Sulfolobustokodaii strain7为对象,首次研究了古菌的增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白与丝/苏氨酸蛋白激酶之间的相互作用,以及这种相互作用对PCNA功能的调控影响,主要取得了以下几个方面的结果: (1)采用细菌双杂交和 Pull-down/Western blot等实验证实了三个 PCNA蛋白与丝/苏氨酸蛋白激酶ST0686之间存在物理相互作用。(2)利用表达纯化的蛋白证实了 ST0686蛋白激酶在体外能够分别将三个 PCNA蛋白磷酸化,但三个PCNA亚基互相抑制它们各自的磷酸化,其中三聚体PCNA被ST0686磷酸化的程度最弱。(3)三个PCNA单体都能刺激StPolB1的DNA聚合酶活性,但三聚体的刺激作用最强;当PCNA磷酸化后三个亚基分别对StPolB1聚合活性的刺激都得到显著增强,但是PCNA三聚体的这种刺激作用却受到明显抑制。(4)采用免疫共沉淀技术证实,三个PCNA蛋白的磷酸化形式在古菌体内也能够探测到。 本研究首先在古菌中发现并证实了PCNA蛋白与丝/苏氨酸蛋白激酶之间的相互作用和功能联系,这些成果对于深入研究古菌的DNA复制和细胞周期调控奠定了基础,同时也为最终阐明高等真核生物的相关机制提供了重要线索。
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