硬蜱是一类可寄生于多种温血动物(包括人)的体外寄生虫。宿主的血液是硬蜱唯一的营养来源。由于硬蜱具有叮咬时间较长,吸血量较多以及可多次反复叮咬等特点,因此被硬蜱叮咬过的家畜可表现为被毛散落,叮咬处皮肤出现溃、坏死、情绪躁动、食欲不振等症状；除了以上直接危害之外,硬蜱还可传播多种病原如细菌、病毒、原虫、立克次氏体等从而造成人和动物患病。硬蜱生活史较为复杂,所以国内外学者多致力于硬蜱生物学特性的研究。目前全球气候变暖给硬蜱以及蜱传病造成了巨大的影响。气温升高不仅扩大了硬蜱的分布范围而且促进了蜱传疾病的流行。尽管国内外许多学者对蜱的分类、生物学特性等进行了大量的研究,但有关温度对硬蜱生物学特性影响的分子机制研究很少。半胱氨酸蛋白酶是国内外公认的一种新型抗蜱候选分子,同时也是重要的代谢酶,因此本研究对三种硬蜱体内半胱氨酸蛋白酶的活性和温度之间的关系做了详细的探讨。研究首先对三种硬蜱体内半胱氨酸蛋白酶保守型片段进行克隆及同源性分析,之后对微小扇头蜱体内半胱氨酸蛋白酶进行原核表达并分析其体外活性；在确定了实验室条件下硬蜱适宜的饲养温度后,分析温度变化对三种硬蜱体内半胱氨酸蛋白酶活性的影响。1)三种硬蜱半胱氨酸蛋白酶保守序列的获取以微小扇头蜱、亚东璃眼蜱、镰形扇头蜱cDNA序列为模板,利用半胱氨酸蛋白酶核苷酸序列保守性引物进行PCR扩增和克隆。测序结果表明三种硬蜱所得基因片段均含保守区域并且与NCBI数据库中扇头蜱属,革蜱属的半胱氨酸蛋白酶基因序列的同源性高于80%；与血蜱属的半胱氨酸蛋白酶基因序列的同源性高于70%。2)微小扇头蜱半胱氨酸蛋白酶全长序列的克隆、表达以及活性检测设计微小扇头蜱半胱氨酸蛋白酶全长引物,克隆其ORF,构建原核表达载体pET-28a-cys后在大肠杆菌BL21中进行原核表达,对自我激活后的重组蛋白进行活性检测。结果显示微小扇头蜱半胱氨酸蛋白酶基因全长1041bp,编码332个氨基酸,和已报道的微小扇头蜱半胱氨酸蛋白酶基因序列有98%的同源性。只有在酸性条件下自我激活的重组蛋白才可发挥其水解底物的活性。3)硬蜱适宜生长温度的确定在实验室条件下设定22℃、28℃、37℃三个温度级,分别饲养镰形扇头蜱和亚东璃眼蜱,观察不同温度下各硬蜱各发育阶段的生物学特性差异。结果显示两种硬蜱幼蜱、若蜱蜕皮率以及卵的孵化率均在28℃时表现为最佳。4)温度差异对于三种硬蜱半胱氨酸蛋白酶活性的影响选择24℃、28℃、32℃三个温度级,分别饲养三种硬蜱,提取三组硬蜱各发育阶段饲养1d、3d、5d的体内半胱氨酸蛋白酶,分别比较各组蛋白酶水解特异性底物的活性。结果显示温度和半胱氨酸蛋白酶活性有关,在2℃-32℃范围内,随着温度的升高,同一天内幼蜱和若蜱体内的半胱氨酸蛋白酶的活性逐渐降低,因此温度上升提高了其在硬蜱一定发育阶段体内的代谢速度,即加速其在硬蜱体内的利用。本研究所获得的结果,在全球气候变暖趋势下给蜱以及蜱传病的防控提供了重要的理论基础,半胱氨酸蛋白酶有可能成为一种防控蜱传病的新型药物靶标。