苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis，Bt)是革兰氏阳性细菌(G+)，在其芽胞形成同时会产生伴胞晶体，这种伴胞晶体含有一种或几种杀虫晶体蛋白，对双翅目、鳞翅目、鞘翅目和直翅目等昆虫具有毒性。Bt作为一种环境友好，高效的微生物杀虫剂被广泛应用于农林业害虫防治中。但是由于目前Bt杀虫剂品种较单一，杀虫谱较窄，杀虫速度相对较慢，影响了生物杀虫剂的生产和应用，因此需要发掘新的杀虫晶体蛋白，以扩展杀虫谱范围并增加杀虫效果。随着实验技术的改进，每年新发现的杀虫蛋白基因数目迅速增长，据统计目前已报道的基因已经超过了700多种。新基因的发掘为新Bt杀虫剂的开发以及抗虫转基因植物提供了基因资源。　　 本文通过生物测定，从实验室保存的388株苏云金芽胞杆菌中筛选出了28株对蚊幼虫有毒性的菌株。通过设计10大类基因cry1、cry2、cry4、cry11、cry30、cry32、cry48、cry49、cyt1和cyt2的简并引物，对筛选出的有毒菌株进行相关基因的检测，其中19株菌中检测出了cry1类基因，17株菌检测出了cry2类基因，另外检测出cry4类基因，cry11类基因，cyt1类基因，以及cyt2类基因的菌株均为4株。测序分析发现，90％以上的基因都与已经报道的基因有95％以上的相似性，而从Bt HD521菌株中扩增获得的基因片段与已报道的基因仅有67％的一致性，分析其可能为一个新的杀虫基因。通过Genome walking技术，从Bt HD521中获得了6.7 kb的DNA片段。序列分析表明该DNA片段含有一个3，177 bp的ORF，与已经报道的杀虫晶体蛋白Cry7Fa具有76％的一致性，其上游有一个405 bp的ORF，与已经报道的P19伴侣蛋白具有47％的一致性。采用自身和外源启动子进行了两个蛋白基因的表达、纯化和特性分析。结果表明，3，177 bp的ORF能在在大肠杆菌中和苏云金芽胞杆菌无晶体突变株得到了成功表达。进一步的研究表明，该基因只能利用自身启动子进行表达，而不能利用cry1 Ca、bin、 cyt1Aa等基因的启动子进行表达，说明该蛋白基因的表达具有一定的启动子特异性。电镜观察和蛋白分析表明，该蛋白大小为130 kDa左右，能在细菌芽胞期形成菱形晶体。对蚊幼虫的生物测定表明，重组表达蛋白对蚊幼虫、棉铃虫和甜菜夜蛾无明显的毒杀作用。同时发现p15基因可在苏云金芽胞杆菌无晶体突变株中表达，具有同P20伴侣蛋白相同的功能，可以使Cyt1Aa蛋白在苏云金芽胞杆菌无晶体突变株中大量表达形成晶体。通过敲除掉p15基因和保留p15基因发现，P15蛋白缺失并不影响晶体的形状和大小，但是却影响晶体蛋白的表达量，P15辅助蛋白的存在能显著增强晶体蛋白表达。根据目前存在的新基因新颖性命名方法，3，177 bp的ORF编码一个二类新基因，暂命名为cry7La(1)，而其上游的405 bp的ORF编码一个新的伴侣蛋白，命名为p15。本研究鉴定了一个一个新的二类杀虫基因和一个新的辅助蛋白基因p15，丰富了苏云金芽胞杆菌杀虫基因资源库，为杀虫菌株的遗传改良和转基因生物的构建提供了基因资源。