阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD）是一种常见的以进行性记忆减退、认知障碍为主要临床表现的中枢神经系统退行性疾病，病理改变以大脑皮层和海马等脑区的细胞外老年斑形成、细胞内出现神经纤维缠结、神经突触的丢失和神经元大量死亡为特征。关于AD的发病机制说法各异，但均无定论，因而缺乏有效的预防与治疗手段。越来越多的研究表明，β-淀粉样蛋白（β-amyloid protein，Aβ）在脑组织中的过度沉积可能与AD的发病密切相关，是AD形成和发展的关键因素。20世纪90年代初，Yankner等首先观察到较高浓度的Aβ_1-42能引起神经元死亡；之后的研究又证实Aβ_25～35，一个小的Aβ片段具有与完整肽链相类似的毒性作用，因而认为Aβ_25～35可能是Aβ发挥毒性作用的必需结构或活性中心。最近，本实验室和其他学者的工作证实，Aβ_31-35一个更小的肽段，也具有与完整肽链和Aβ_25～35相似的毒性作用，提示这个五肽可能是Aβ中更短的关键性序列结构，在Aβ发挥毒性作用的过程中具有更重要的意义。Stadelmann等（1998）证实了AD发病过程中神经元死亡的主要形式是凋亡，之后的离体实验证实Aβ包括Aβ_1-42、Aβ_25-35及Aβ_31-35都可引起神经元凋亡，因而探讨能抑制Aβ所致的神经元凋亡就成为预防及治疗AD的重要途径。 Humanin（HN）是Hashimoto（2001）报道的存在于AD患者脑组织中具有神经保护作用的多肽类物质。实验证实，HN能有效抑制多种FAD基因和Aβ衍生物诱发的神经元的死亡，并且证实HN可抑制Aβ_1-42引起的原代培养神经元的死亡，但这种抑制机制未见相关报道。由于Aβ_31-35与Aβ_1-42具有相似的毒性作用，那么HN是否也能抑制Aβ_31-35的神经毒性以及作用机制如何?本实验从以下三方面进行观察和分析：1、观察HN对Aβ_31-35致神经元凋亡的影响；2、对HN拮抗Aβ_31-35致凋亡作用的机制进行研究分析；3、观察HN对Aβ_31-35引起的神经元[C_a²⁺]_ⅰ升高的影响。 第一部分 Humanin拮抗Aβ_31-35致凋亡作用的观察 文献报道，HN能够抑制Aβ_1-42的毒性作用。本实验室及其他学者的研究结果显示，Aβ_31-35与Aβ完整肽链具有相似的毒性作用。那么HN是否也能抑制Aβ_31-35的毒性作用?本部分采用原代培养的大鼠大脑皮层神经元观察HN对Aβ_31-35致凋亡作用的影响。 方法：选用≤3天的Wistar大鼠，分离皮层神经元，阿糖胞苷去除胶质细胞纯化神经元，MAP₂鉴定神经元。在加入Aβ_31-35（25μM）同时或提前不同时间（8小时、16小时）加入不同浓度（5μM、10μM、20μM）的HN，再加入Aβ_31-35（25μM）继续培养24小时后，采用电镜观察神经元凋亡的形态学改变；采用流式细胞术、TUNEL法、Hochest 33342染色定