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目的:七氟醚(Sevoflurane)是一种新型的卤族类麻醉药,其理化性质稳定,诱导迅速,对气道刺激性小,对循环系统抑制轻,苏醒快而完全,且无组织毒性,是临床上应用较广泛的的吸入性麻醉药。树突状细胞(dendritic cell,DC)是迄今为止功能最强的专职抗原提呈细胞(APC),也是唯一能够在体内外激活初始T淋巴细胞的APC,在启动细胞免疫应答中发挥重要作用,但是骨髓中新生成的DCs前体一般需要经过三个阶段即未成熟阶段、迁移阶段、成熟阶段才能提呈抗原并启动免疫应答,而从免疫表型上则分为未成熟树突状细胞和成熟树突状细胞。本实验通过七氟醚作用于两种表型的树突状细胞即未成熟树突状细胞(imDCs)和成熟树突状细胞(mDCs),来探讨七氟醚对树突状细胞成熟过程及成熟树突状细胞活力的影响。方法:无菌条件下采集健康孕妇正常胎儿脐带血70ml左右,用肝素抗凝。在超净工作台上用生理盐水:脐带血为1:1的比例稀释后,再按照稀释血:淋巴细胞分离液之比为2:1的比例缓缓加到淋巴细胞分离液上层,密度梯度离心法获得脐血单个核细胞(CBMC),将细胞用生理盐水清洗3次后弃上清,加入无血清培养基重悬并计数单个核细胞,调整细胞密度为2×106/ml,接种于6孔培养板中,每孔3ml。在37℃、5%CO2培养箱中孵育2h,移去悬浮细胞,无血清培养基轻轻洗涤两次,以去除残留非贴壁细胞,保留贴壁细胞即为单核细胞,调整细胞数量为1×106/ml。加入细胞生长因子:即重组人类粒细胞集落刺激因子(rhGM -CSF)50ng/ml,重组人类白介素–4(rhIL-4)10ng/ml。然后随机分为3组:常规培养组作为对照组(C组)、未成熟表型组(I组)、成熟表型组(M组)。C组:常规加入rhGM-CSF、rhIL-4及重组人类肿瘤坏死因子–α(rhTNF-α),在37℃、5% CO2培养箱持续培养14d。I组:培养至第6天用2.5%七氟醚(为混合气体体积分数),处理2h,其余同C组。M组:培养至第13天用2.5%七氟醚(为混合气体体积分数),处理2h,其余同C组。培养过程中每天在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态学变化。培养到第14d时收集细胞以流式细胞分析仪分析各组细胞免疫表型抗原CD80、CD86、CD83、HLA–DR(主要组织相容性复合体MHC-Ⅱ类分子之一)的表达率,收集培养到第14d的各组细胞培养上清液用双抗体夹心免疫(ELISA)法测定其分泌IL–12的活力。取健康志愿者外周血20ml,同上述方法制备外周血单个核细胞(PBMC),加入含有10%小牛血清的RPMI1640培养液,在培养箱中培养2h,收集悬浮细胞作为同种异体混合淋巴细胞,调整细胞数量为2.0×106 /ml,用RPMI1640培养基培养7d作为反应细胞,培养到第14d的各组DCs作为刺激细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测DCs刺激混合淋巴细胞的增殖活力。结果:1七氟醚对各组DCs形态的影响:倒置显微镜观察,七氟醚未处理之前,第2天,细胞大小均一,表面光滑,各组细胞均于第3-4天开始出现集落,细胞体积逐渐变大。见Fig.1～2。第5-6天细胞表面不规则,有短毛刺样突起;七氟醚处理后第14天观察,与C组相比,I组细胞毛刺短粗,较稀少,M组与C组基本相似,细胞表面毛刺样突起较多且长。见Fig.3～7。扫描电镜观察细胞表面状态与以上结果一致。见Fig.8～10。2七氟醚对DCs免疫表型抗原阳性率的影响:CD80/CD86、CD83/ HLA–DR表达率,C组细胞分别为36.94±2.85%、12.91±2.44%,I组细胞表面表型较低分别为19.64±2.57%、7.12±1.45%,两组差异有显著性(P<0.05),而M组与C组无明显差异(P>0.05)。见Table 13七氟醚对DCs刺激混合淋巴细胞增殖反应活力的影响:I组细胞刺激T细胞增殖活力较弱,M组与C组比较无明显差异。见Table 24七氟醚对DCs分泌IL-12活力的影响:C组分泌IL-12水平为958.22±321.21 pg/ml ,I组分泌IL-12活力较C组较弱为377.14±311.51 pg/ml(P<0.05),M组与C组无明显差异(P>0.05)。见Table3结论:七氟醚能抑制树突状细胞的成熟过程,但对成熟树突状细胞活力的影响不明显。