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梅花鹿产茸量是茸鹿育种工作中的一项重要指标,决定着茸鹿的经济效应。褪黑激素(MLT)是一种光信号激素,能从多方面影响鹿茸生长,提高鹿茸的年产量。褪黑激素需要与其相应的受体结合才能发挥其生物学效应,因此对褪黑激素及其受体(MTNR)进行研究,具有重要的经济效益和生物育种效益。本研究选择的是在体外离体条件下,分别分离培养梅花鹿鹿茸软骨细胞和间充质细胞,并且通过添加不同浓度水平的褪黑激素作用鹿茸间充质细胞,来探究在体外培养条件下不同浓度褪黑激素对鹿茸间充质细胞的影响以及褪黑激素发挥效应的信号通路。本研究所取样本来自湖北荆门五三梅花鹿(双阳品种)鹿场。本研究应用细胞培养、逆转录-PCR、Western blot技术、共聚焦显微定位、流式细胞技术、MTT法等技术,通过比较几种不同浓度褪黑激素对鹿茸间充质细胞生长和增殖的作用以及其受体在细胞中的表达量,旨在：(1)筛选促进鹿茸间充质细胞增殖效果最佳的褪黑激素浓度,为提高鹿茸产量提供依据；(2)探讨褪黑激素及其受体作用的信号通路,为进一步提高鹿茸产量奠定基础。主要研究内容和结果如下：1.采用逆转录-PCR技术和Western blot技术检测了褪黑激素受体MT1mRNA、蛋白在鹿茸间充质细胞中的表达情况,反转录后电泳检测到目的条带,说明MT1mRNA在鹿茸间充质细胞中能够正常转录；2.利用细胞免疫荧光技术定位MT1蛋白在鹿茸间充质细胞中的亚细胞分布,结果表明,MTl蛋白在鹿茸间充质细胞中能够正常翻译。褪黑激素受体MTl蛋白分布于胞浆和核膜内。3.外源褪黑激素对鹿茸间充质细胞的影响本实验设置了六个不同剂量浓度(0pg/mL,400pg/mL,800pg/mL,1200pg/mL,1600pg/mL,2000pg/mL)的外源MLT处理组,检测外源MLT对鹿茸间充质细胞生长发育及功能的影响。应用MTT法检测细胞的增殖,应用流式细胞技术检测MLT对间充质细胞周期的影响,同时采用酶联免疫法测定了培养液中睾酮和雌二醇浓度。结果表明,MLT可以促进鹿茸间充质细胞的增殖,其中浓度为800pg/ml的MLT促进作用明显。MLT对间充质细胞周期有影响,处于DAN合成期的细胞数量增多；不同浓度的MLT添加到细胞培养液中培养鹿茸间充质细胞,可促进间充质细胞中睾酮的分泌,但对雌二醇无显著影响。