研究背景肾单位肾痨（Nephronophthisis, NPHP; MIM256100）是一种常染色体隐性遗传的慢性小管间质性肾病，是导致儿童和青少年终末期肾病（ESRD）最常见的遗传性疾病[1]。1951年，由Fanconi等首次报道[2]。据统计[3,4]，NPHP的发病率在加拿大活产婴儿中为1/50,000，在美国为1/1,000,000。该病可以根据ESRD发生的年龄进行临床分型[1]：婴儿型（infantile），少年型（juvenile）和青年型（adolescent），分别发生ESRD的平均年龄为1岁，13岁和19岁。国外研究资料表明，NPHP约占儿童慢性肾衰竭的10%-14%[5,6]。其中少年型属最常见的表型，在欧洲占终末期肾脏病患儿的6%-10%[5]。国内尚无该病的确切统计数据。该病发生ESRD之前，临床症状多无特异性，常常表现为多尿、烦渴、贫血等[7]。超声检查肾脏大小正常或缩小，回声增强，皮髓质分界不清，晚期可见肾脏皮髓质交界区囊肿[8-11]。但婴儿型NPHP除外，肾脏表现稍增大，常常易与多囊肾混淆[12]。组织病理学特点为肾小球球周和间质纤维化，肾小管基底膜断裂和肾小管扩张并皮髓质交界区囊肿形成的三联征[13]。由于该病起病隐匿，临床表现缺乏特异性，仅表现为慢性肾衰竭的症状，无明显的血尿和蛋白尿，无高血压，虽属于囊性肾脏疾病范畴，但囊肿多在疾病晚期出现甚至影像学检查检测不到。如有典型临床表现，肾活检提示肾小球周围和肾间质纤维化，肾小管基底膜增厚、变薄或断裂，小管上皮细胞萎缩和肾小管囊性扩张以及肾小球硬化和玻璃样变等，可以诊断该病。但有时病理改变并不典型，因此，有学者提出肾脏病理仅具有辅助诊断价值，并不具有特异性[13]。近年来，随着分子生物学研究的迅猛发展，分子遗传学检测成为诊断NPHP的重要手段，并且可以避免肾活检的侵入性检查[14]，同时有助于产前诊断和遗传咨询及优生优育。而且致病基因的不断鉴定，有利于揭示该病的发病机制，为将来基因靶向治疗奠定基础。目的：对临床拟诊NPHP的6例患儿行基因突变检测与分析，为临床诊断提供依据，以及为计划生育提供遗传咨询。方法：以6例临床拟诊NPHP患儿及其7名相关家系成员为研究对象。提取研究对象外周血基因组DNA，应用聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）首先扩增NPHP1基因内多个微卫星标记及内参标记，根据各标记扩增产物的有无判断是否存在纯合缺失及缺失片段的大小。若不存在缺失，则依次扩增NPHP1、NPHP4、NPHP5（IQCB1)、NPHP2（INVS）及NPHP3基因所有外显子及其周围的部分内含子，并应用上下游引物对PCR产物进行直接测序，若有小片段缺失突变则进行克隆测序并分析。10例尿检正常的汉族成年人为对照人群。结果：1．临床特征：男5例，女1例，诊断时年龄7月～13岁。其中临床符合少年型NPHP诊断4例，符合婴儿型NPHP诊断2例。仅1例有家族史，该患儿叔叔患囊肿性肾病（具体不详），因ESRD已行肾移植。6例均有生长发育落后，以多饮、多尿就诊2例，以面色苍白、疲倦就诊2例，以发现肾功能异常就诊1例，以生长发育落后就诊1例。其中1例从小弱视，1例眼底检查提示黄斑病变，其余眼底正常。5例24小时尿蛋白定量0.57±0.69g，肾功能不全III期2例，IV期1例，肾衰竭3例。超声显示双肾偏小5例，双肾大小正常1例，全部表现皮质回声增强，皮髓质分界模糊，4例双肾发现大小不一囊肿。3例行CT显示双肾体积偏小，皮髓质内多发微囊状强化减低影。3例行MRI水成像显示双肾体积偏小，肾实质多发小点状异常信号，多位于皮质。2．基因检测结果：6例患儿NPHP1基因内多个微卫星标记及内参标记均有扩增产物，提示不存在NPHP1大片段纯合缺失。4例少年型NPHP患儿均未检出NPHP1、NPHP3基因外显子突变，3例少年型NPHP患儿NPHP4基因IVS20-2A>T杂合突变，其中1例为NPHP4基因IVS2-4delC/IVS20-2A>T复杂杂合突变和NPHP5基因c.-147_-141delTGGGAG/c.1301G>A复杂杂合突变。2例婴儿型NPHP患儿NPHP2、NPHP3基因未检出外显子及剪接位点突变。结论：1．临床出现多饮、多尿、贫血、生长迟缓等表现，伴血肌酐升高，影像学显示双肾较同龄儿小或双肾大小正常，皮髓质分界不清，伴或不伴皮髓质交界区囊肿的儿童，应高度怀疑肾单位肾痨。2．基因诊断是确诊该病重要手段，并助于遗传咨询和指导。3．本研究中少年型NPHP患儿未检出NPHP1大片段纯合缺失及其外显子突变，NPHP4基因IVS20-2A>T杂合突变可能是3例少年型NPHP患儿的致病突变。4．本研究中未检出婴儿型NPHP患儿的NPHP2（INVS）和NPHP3基因外显子突变。5．存在未发现的婴儿型NPHP其他位点突变，待进一步研究。