我国是鳗鲡养殖大国,但细菌性疾病危害严重,创伤弧菌和迟缓爱德华氏菌是导致鳗鲡疾病的主要病原,研究针对这两种菌的疫苗具有潜在的应用价值。传统疫苗的灭活疫苗毒性较大,同种病原菌不同血清型间一般无交叉保护;基因工程亚单位疫苗也仅针对单种病原菌的感染而存在保护范围窄、保护率较低等问题,很难应用于水产养殖实践。本研究将创伤弧菌和迟缓爱德华氏菌外膜蛋白基因进行体外拼接后构建表达载体并进行高效表达,以研究二联外膜蛋白表达产物同时抵抗两种病原菌感染的能力,主要研究内容与结果如下:（1）本研究以自发病养殖鳗鲡分离并经攻毒感染证实的创伤弧菌和迟缓爱德华氏菌为材料,提取其基因组DNA,利用GenBank数据库已有的外膜蛋白基因序列设计引物,通过PCR方法克隆迟钝爱德华氏菌外膜蛋白（ompA）和创伤弧菌外膜蛋白（ompU）的基因全长序列。通过相关软件对两个基因进行蛋白质结构、亲水性和免疫原性分析与预测,从而获得基因全长中亲水性与免疫原性较好且编码膜外多肽的两个基因片段序列。通过融合PCR方法体外连接这两个基因片段并构建了二联表达载（pGEX-2T-His-Vibrio-Edwa）。（2）采用不同的诱导剂（IPTG）浓度、诱导温度、诱导时间和诱导时菌液浓度对重组表达载体的表达条件进行了探讨。结果表明,不同的诱导剂（IPTG）浓度、诱导温度、诱导时间和诱导时菌液浓度对重组表达载体的表达没有明显影响。本研究在菌体浓度OD_600nm=0.8时,采用0.25mM的IPTG经16℃诱导培养过夜后表达。表达产物采用镍柱纯化获得分子量77.6 kD的高纯度蛋白。（3）为研究重组外膜蛋白的免疫原性,本研究将180尾日本鳗鲡平均分为PBS对照组、二联灭活菌苗免疫组和二联表达外膜蛋白免疫组等3个组（均与等量弗式不完全佐剂混合）,于免疫后14 d、21 d、28 d和42 d丁香油麻醉鳗鲡后断尾采血,通过测定这4个时间点鳗鲡全血细胞转化、血清中特异性抗体水平和鳗鲡血清、体表粘液、肝脏和肾脏组织匀浆中的溶菌酶含量研究其免疫原性。于免疫后28 d,采用创伤弧菌（1×10⁷cfu/尾）、迟顿爱德华氏菌（0.05×10⁷cfu/尾）和嗜水气单胞菌（2×10⁷cfu/尾）分别腹腔注射0.2ml感染3组鳗鲡,以检测二联外膜蛋白的免疫保护作用。结果表明,免疫后28 d创伤弧菌和爱德华氏菌攻毒后二联外膜蛋白组的鳗鲡存活率分别从第5 d和第12 d开始显著高于对照组,相对免疫保护率均达到了50%。与PBS对照组相比,外膜蛋白组鳗鲡的全血细胞免疫功能在免疫后21 d时高于灭活菌组和PBS组,免疫后28 d,灭活菌组全血细胞转化水平显著（P<0.05）高于外膜蛋白组;抗体检测结果表明,免疫后免疫后21 d和28 d,两个免疫组的抗体效价分别显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）高于PBS组,至免疫后42d,二联灭活菌苗免疫组鳗鲡抗体水平极显著（P<0.05）高于另两个组。溶菌酶检测结果表明,不同处理组不同时间段血清、粘液和肝肾组织悬液的溶菌酶含量存在显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）差异。以上结果均表明鳗鲡源创伤和迟顿爱德华氏菌外膜蛋白基因二联基因表达产物免疫鳗鲡后可提高日本鳗鲡的免疫功能以及养殖鳗鲡对这两株菌感染的抵抗力,从而可能应用于鳗鲡基因工程疫苗的研发。