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[目的]
观察雷帕霉素(Rapamycin，Rapa)作用于白血病HL-60细胞及与阿糖胞苷(Cytarabine，Ara-C)联合应用后对细胞增殖、自噬及凋亡的影响，探讨自噬在体外急性髓系白血病细胞株治疗中的作用，试图为白血病的治疗提供新的思路。
[方法]
1.实验分对照组和实验组，其中实验组分:Rapa组(1nmol/L，5nmol/L，10nmol/L,50nmol/L,100 nmol/L); Ara-C组(0.125umol/L,0.313umol/L,0.625umol/L,1.25umol/L,2.5umol/L,5.0umol/L);合用组(50nmol/L Rapa+2.5umol/L Ara-C)。
2.实验方法:
(1)体外培养HL-60细胞株，取对数生长期的细胞进行实验研究。
(2)应用CCK8法检测不同时间点(12h、24h、48h)Rapa，Ara-C对体外培养HL-60细胞的增殖抑制作用，找出最佳作用时间及作用浓度。
(3)流式细胞仪检测各组HL-60细胞凋亡率。
(4)电镜观察各组的细胞形态及自噬囊泡。
(5)应用Western Blot测定各组自噬相关基因LC3B的表达。
[结果]
1.CCK8结果显示:
(1)Rapa可抑制HL-60细胞的增殖，随药物浓度的增加、作用时间的延长，抑制率渐增加，12h、24h、48h的IC50分别为127.60 nmol/L、71.29 nmol/L、53.06 nmol/L。
(2)Ara-C对HL-60细胞具有细胞毒性，且具时间、剂量依赖性，12h、24h、48h的IC50分别为5.68 umol/L、3.65 umol/L、3.26 umol/L。
(3)合用组的细胞增殖抑制率(54.55±0.61％)较单用Rapa组(47.20±1.60％)、Ara-C组(49.32±0.46％)时明显，差异有统计学意义(P＜0.01)。
2.流式细胞仪检测显示:Rapa组细胞凋亡率无明显变化，与对照组的差异无统计学意义（P＞0.05）;Ara-C组中细胞凋亡率随Ara-C浓度的增加而上升，与对照组比较，差异具有统计学意义（P＜0.01）;合用组的细胞凋亡率(11.33±0.61％)较单用Ara-C(7.57±0.15％)时增加，差异具有统计学意义(P＜0.01)。
3.电镜显示:对照组中偶见细胞胞浆出现单个自噬囊泡，Rapa组随Rapa浓度的增高，胞浆自噬囊泡数量有渐增多的趋势;而Ara-C组可观察到细胞凋亡现象，并未见自噬囊泡;合用组细胞胞浆中可见自噬囊泡，胞体变小，胞浆及核质密度增加。
4.Western Blot结果显示:Rapa组LC3B含量随Rapa浓度增高而增加，与对照组相比差异具统计学意义(P＜0.01)，组内两两间比较有统计学意义(P＜0.01); Ara-C处理HL-60细胞24h后LC3B水平(39.68±0.97)与对照组(40.75±1.29)接近(P＞0.05);合用组LC3B蛋白含量(87.24±0.89)与对照组(40.75±1.29)相比有统计学意义(P＜0.01)，与Rapa组中50nmol/L浓度的Rapa组(88.97±0.84)接近，差异不具有统计学意义(P＞0.05）。
[结论]
1.Rapa可诱导HL-60细胞发生自噬，并抑制细胞增殖。
2.Ara-C对HL-60细胞具有细胞毒性，促使细胞发生凋亡。
3.Rapa与Ara-C合用在抑制HL-60细胞增殖方面具有协同作用，并引起凋亡增加，但不会引起自噬的增加。