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第一部分PARP-1对LPS诱导的HMGBl核浆移位和释放的影响目的：研究LPS激活RAW264.7细胞PARP-1活性变化的时间规律,以及PARP-1对RAW264.7细胞内HMGBl分泌的影响,探讨PARP-1在炎症反应中的作用。方法：通过cell ELISA法测定LPS刺激后RAW264.7细胞内PARP-1活性变化的时间规律；用LPS(100ng/m1)+DMSO.LPS+3-AB(10mM)刺激RAW264.7细胞,通过免疫印迹法检测细胞上清液和胞浆胞核内HMGBl的变化；构建PARP-1siRNA质粒和对照的sc siRNA质粒,瞬时转染到RAW264.7细胞中,用100ng/ml的LPS处理转染后的细胞,通过免疫印迹法检测细胞上清液和胞浆胞核内HMGBl的变化。结果：LPS刺激RAW264.7细胞后,PARP-1活性升高,刺激4小时后活性达到高峰：在LPS+DMSO刺激后4、8、16、24小时,细胞培养上清中HMGBl的含量增加,刺激后2、4、8小时,细胞浆中HMGBl的含量增加,胞核内HMGBl含量降低,加用3-AB刺激和转染PARP-1siRNA沉默PARP-1表达可以抑制上述反应。结论：LPS刺激RAW264.7细胞后PARP-1活性增加,抑制PARP-1的活性或沉默其表达,可以减少HMGBl向胞浆移位和向细胞外释放。PARP-1参与了LPS诱导的HMGBl核浆移位和释放的调节。第二部分PARP-1通过促进HMGB1乙酰化介导LPS诱导的HMGB1核浆移位目的：研究LPS诱导的RAW264.7细胞PAR-1对HMGB1乙酰化程度的影响,以及PARP-1对RAW264.7细胞内乙酰化酶和去乙酰化酶活性的影响,探讨PARP-1在炎症反应中的作用。方法：用3-AB抑制PARP-1活性或将PARP-1沉默后,通过免疫沉淀法纯化HMGB1蛋白,然后用western blot的方法检测HMGB1的乙酰化修饰,用比色法检测RAW264.7细胞内HAT和HDAC活性。结果：LPS刺激RAW264.7细胞后,细胞内HMGB1的乙酰化水平增加,抑制PARP-1活性或沉默PARP-1的表达降低胞内HMGB1乙酰化水平,降低HAT活性、提高HDAC活性。结论：PARP-1通过提高胞内HAT活性促进HMGB1的乙酰化,介导HMGB1核浆移位。第三部分HMGBl蛋白NLS的PAR修饰位点突变对其核浆移位的影响目的：研究HMGBl蛋白NLS的PAR修饰位点突变对HMGBl核浆移位的影响,探讨PARP-1在炎症反应中的作用。方法：用3-AB抑制PARP-1活性或将PARP-1沉默后,通过免疫沉淀法纯化HMGBl蛋白,然后用western blot的方法检测HMGBl的核糖基化,对HMGBl蛋白NLS的PAR修饰位点进行点突变,构建HMGBl-GFP融合蛋白,转染RAW264.7细胞,LPS激活细胞,用western blot的方法检测LPS活化后胞浆和胞核内HMGB1的表达,荧光显微镜下直接观察胞浆胞核内HMGBl表达；NLS的PAR修饰位点突变后用3-AB抑制PARP-1活性,用western blot的方法检测胞浆和胞核内HMGBl的表达。结果：LPS刺激RAW264.7细胞后,细胞内HMGBl的核糖基化水平增加,抑制PARP-1活性或沉默PARP-1的表达降低胞内HMGBl核糖基化水平,HMGBl的NLS序列的PAR修饰位点突变抑制HMGBl向胞浆移位,NLS的PAR修饰位点突变后,抑制PARP-1的活性对HMGBl核浆移位没有影响。结论：NLS的PAR修饰位点在HMGBl核浆移位的调节中占主导地位。第四部分PARP-1对LPS诱导的脓毒症模型小鼠的影响目的：探讨PAPR-1对脓毒症小鼠血清HMGB1含量以及对脓毒症小鼠生存时间的影响。方法：SPF级昆明雄性小鼠60只,随机分为4组：对照组(PBS组),溶剂对照组(LPS+DMSO组),3-AB干预组(LPS+3-AB组),AZD2281干预组(LPS+AZD2281组),每组15只。腹腔注射LPS法制作小鼠脓毒症模型。对照组腹腔注射PBS,余下三组先在腹腔分别注射DMSO、3-AB、 AZD2281,30min后腹腔内注射LPS做脓毒症模型。完成后8h分别处死各组小鼠3只,心脏采血,离心后分离血清,行western blot检测血清中HMGB1含量,余下小鼠观察120h,记录死亡时间和数目。结果：LPS刺激后小鼠血清中HMGB1的含量增加,LPS+3-AB组和LPS+AZD2281组在刺激后8h血清中HMGB1含量明显低于LPS+DMSO,差异有显著性(P<0.05)。LPS致脓毒症导致了明显的致死效应,经3-AB和AZD2281治疗后显著延长了小鼠的生存时间,PBS对照组观察期内无死亡,LPS+DMSO组生存时间明显短于LPS+3-AB组和LPS+AZD2281组。结论：抑制PARP-1的活性可下调脓毒症小鼠血清HMGB1水平、提高存活率。