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Leptosphaeria rhodopsin(LR)是在真核小球腔菌属Leptosphaeria maculans中发现的,也是第一个在真核生物中发现的具有质子转运功能的视黄醛蛋白。基于其感光和传递质子的特性,LR蛋白已经被成功的应用于光遗传学和生物电势探测器等领域。 目前人们对LR蛋白的研究大多集中在其质子转运机理上,而研究方法多为谱学分析,本文尝试使用晶体结构解析的方法来直接获得LR蛋白的结构信息。首先我们在LR蛋白去垢剂溶解状态下采用悬滴气相扩散法培养晶体,经过初筛及结晶条件优化得到了衍射分辨率最高约为6埃的晶体,然而仅通过这些数据无法解析出晶体的结构。为了得到衍射分辨率较高的晶体,我们接着尝试了膜蛋白结晶中另一种常用的方法,即脂立方相法。经过初筛及结晶条件的优化,我们筛选出了一种较好的结晶条件(0.1M ADA,0.6M(NH4)2HPO4,0.3M CH3COONa,pH6.6)并且发现脂相中添加1%DOPC,沉淀剂相中添加去垢剂N350能显著使晶体增大,大小达到80-100μm,X射线衍射结果表明晶体最高分辨率能达到3.5埃。 在LR蛋白的应用方面,我们感兴趣的是蛋白的寡聚,膜蛋白的寡聚通常在其结构稳定性或功能活性上起着重要作用,寡聚现象在视黄醛蛋白家族中也十分常见,目前少有关于LR蛋白寡聚的研究的报道。我们通过CD光谱,负染电镜,化学交联和静态光散射等实验方法表征了LR蛋白寡聚体。CD光谱和负染电镜实验结果表明LR蛋白无论在膜上还是去垢剂溶解条件下均以寡聚体状态存在;化学交联和静态光散射结果表明LR蛋白主要以二聚体和四聚体形态存在。紫膜(bacteriorhodpsin三聚体)作为纳米生物复合材料已经被广泛应用于能量转换,传感器和信息储存等领域,然而紫膜在去垢剂环境中稳定性差。为了探索LR蛋白寡聚体在去垢剂环境中应用的可能性,我们首先使用高浓度的四种典型的去垢剂(TX-100,CHAPS,DDM,OG)去溶解LR蛋白寡聚体并用CD光谱检测,结果显示它们都无法将LR蛋白寡聚体溶解成单体,表明LR蛋白寡聚体对多种去垢剂有着极高的稳定性。然后我们检测了LR蛋白在去垢剂条件下的光电流,并与BR做比较,发现BR三聚体被1%TX-100溶解后其光电流幅度约10nA/cm2,远小于文献中报道的紫膜的光电流(60-200nA/cm2),而同样条件下LR蛋白的光电流幅度约为85nA/cm2,且能在CHAPS,DDM或OG去垢剂条件仍保持大于60nA/cm2的光电流幅度,这些表明LR蛋白可能是一种能够代替BR的优良纳米生物材料,尤其是在去垢剂存在时。