Leptosphaeria rhodopsin蛋白结构及寡聚的研究

来源 :中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:weidingsen
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
Leptosphaeria rhodopsin(LR)是在真核小球腔菌属Leptosphaeria maculans中发现的,也是第一个在真核生物中发现的具有质子转运功能的视黄醛蛋白。基于其感光和传递质子的特性,LR蛋白已经被成功的应用于光遗传学和生物电势探测器等领域。  目前人们对LR蛋白的研究大多集中在其质子转运机理上,而研究方法多为谱学分析,本文尝试使用晶体结构解析的方法来直接获得LR蛋白的结构信息。首先我们在LR蛋白去垢剂溶解状态下采用悬滴气相扩散法培养晶体,经过初筛及结晶条件优化得到了衍射分辨率最高约为6埃的晶体,然而仅通过这些数据无法解析出晶体的结构。为了得到衍射分辨率较高的晶体,我们接着尝试了膜蛋白结晶中另一种常用的方法,即脂立方相法。经过初筛及结晶条件的优化,我们筛选出了一种较好的结晶条件(0.1M ADA,0.6M(NH4)2HPO4,0.3M CH3COONa,pH6.6)并且发现脂相中添加1%DOPC,沉淀剂相中添加去垢剂N350能显著使晶体增大,大小达到80-100μm,X射线衍射结果表明晶体最高分辨率能达到3.5埃。  在LR蛋白的应用方面,我们感兴趣的是蛋白的寡聚,膜蛋白的寡聚通常在其结构稳定性或功能活性上起着重要作用,寡聚现象在视黄醛蛋白家族中也十分常见,目前少有关于LR蛋白寡聚的研究的报道。我们通过CD光谱,负染电镜,化学交联和静态光散射等实验方法表征了LR蛋白寡聚体。CD光谱和负染电镜实验结果表明LR蛋白无论在膜上还是去垢剂溶解条件下均以寡聚体状态存在;化学交联和静态光散射结果表明LR蛋白主要以二聚体和四聚体形态存在。紫膜(bacteriorhodpsin三聚体)作为纳米生物复合材料已经被广泛应用于能量转换,传感器和信息储存等领域,然而紫膜在去垢剂环境中稳定性差。为了探索LR蛋白寡聚体在去垢剂环境中应用的可能性,我们首先使用高浓度的四种典型的去垢剂(TX-100,CHAPS,DDM,OG)去溶解LR蛋白寡聚体并用CD光谱检测,结果显示它们都无法将LR蛋白寡聚体溶解成单体,表明LR蛋白寡聚体对多种去垢剂有着极高的稳定性。然后我们检测了LR蛋白在去垢剂条件下的光电流,并与BR做比较,发现BR三聚体被1%TX-100溶解后其光电流幅度约10nA/cm2,远小于文献中报道的紫膜的光电流(60-200nA/cm2),而同样条件下LR蛋白的光电流幅度约为85nA/cm2,且能在CHAPS,DDM或OG去垢剂条件仍保持大于60nA/cm2的光电流幅度,这些表明LR蛋白可能是一种能够代替BR的优良纳米生物材料,尤其是在去垢剂存在时。
其他文献
在已有研究的基础上,该文深入进行RI基因方面的研究.该论文的研究目的是RI的基因工程和RI在基因治疗方面的应用,为此做了以下的一些工作:1.克隆了RI基因:从传代培养的人肝细
军用移动电站(Military Mobile Power Station,简称MMPS)是野战条件下军队武器装备和后勤保障的主要电能来源,是打赢现代化战争的重要保证。其主要组成包括:发电装置部分、功率主电路部分、控制系统部分、运载部分。目前,大量装备部队的MMPS发电装置是柴油发电机组,由于发动机供油系统存在不可避免的扰动问题,其输出电压幅值和频率不稳难以保证武器系统和后勤保障对电能质量的要求。因
该文以发现新的系统学证据为主要目的,较为全面地研究了东亚款冬亚族及其相关类群的外部形态学,首次报道了18属45种植物的花部微观性状,19属64种105个居群的核形态学特征,10
该论文通过生子生物学中的AFLP(amplified fragment length polymorphism)方法,运用相异系数、相似系数、遗传多样性、Nei遗传距离、AMOVA分析、聚娄分析和除趋势面对应分析
PIWI是动物生殖系细胞特异性Argonaute亚家族蛋白,通过与其相互作用的小分子非编码RNA—piRNA形成pi-RISC机器,在表观遗传及转录后水平沉默基因组的转座子、逆转座子等自私性遗
该学位论文的第一部分研究了HIV-1gp120的V3环上GPGRAFY主要中和表位的免疫原性.该学位论文的第二部分研究了17-1A肿瘤相关抗原.
生物对极端环境如洞穴环境的适应性进化是近些年生物学界的热门问题之一。金线鲃属(Sinocyclocheilus)隶属于鲤形目(Cypriniformes),鲤科(Cyprinidae),鲃亚科(Barbinae),是我国特
该研究利用腺病毒为载体的野生型p53基因对两个p53基因突变位点相同的高、低转移的肺癌细胞系AGZY83-a、Anip973和经野生型p16基因转染的高低、转移的肺癌细胞系AGZY83-a、Ai
金线鲃属(Sinocyclocheilus)鱼类是我国鲤科鱼类中的特有属,也是目前世界上洞穴鱼类物种数量最丰富的一个属。该属鱼类表现出强烈的物种分化和明显的形态差异。由于受不同自然生
砂生槐系豆科槐属植物,藏语称蓟瓦,又名西藏狼牙刺,是西藏高原的一种特有植物,也是一种常用中草药.它耐旱、耐寒、抗风、适应范围广,具有极强的沙生适应性,在高原河谷地区生