乳腺癌作为女性中最常见的恶性肿瘤,严重危害女性健康,是女性癌症死亡的一大主因。乳腺癌细胞的恶性增殖、转移和高复发等特性严重影响患者的治疗。靶向治疗法是目前治疗恶性肿瘤的有效手段,其离不开对肿瘤发生发展机制的研究。人乳腺上皮细胞的恶性转化是一个复杂、多步骤的过程,涉及多种分子机制。乳腺癌细胞的持续增殖、转移及侵袭过程也受多种因素调控。因此,鉴定新的在乳腺癌发生发展过程中发挥重要作用的功能蛋白,有助于揭示乳腺癌发生的分子机制,为靶向治疗提供新靶点。C9orf140是一个新鉴定的在多种肿瘤细胞中差异表达的基因。C9orf140作为新的癌症标记物,其通过促进胃癌、结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,进而促进癌症的发生。尽管有文献报道C9orf140在乳腺癌中表达增加,但仍不清楚它是否也通过促进细胞增殖来促进癌症发生。本研究利用生物信息学分析技术,在TCGA数据库中验证了C9orf140在乳腺癌组织中的表达量显著高于正常组织。为了验证C9orf140的表达水平与乳腺癌细胞增殖之间的相关性,利用Ed U（5-Ethynyl-2’-deoxyuridine）和CCK8试剂检测C9orf140蛋白水平变化对乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖的影响。Ed U细胞增殖检测法结果显示,敲降C9orf140后,处于DNA合成时期的细胞数减少,MCF-7细胞增殖受到抑制。此外,CCK8结果也显示下调C9orf140的表达,抑制MCF-7细胞增殖。这些结果表明C9orf140促进乳腺癌细胞的增殖,并与乳腺癌的发生发展密切相关。为了探究C9orf140是如何调控MCF-7细胞增殖,本研究利用TAP/MS技术对C9orf140的互作蛋白进行质谱鉴定,筛选到一个与细胞增殖相关的互作蛋白即沉默信息调节因子1（Silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1）。随后利用免疫共沉淀和GST pulldown实验验证了C9orf140与SIRT1存在相互作用。为了进一步确认C9orf140与SIRT1两者的调控关系,本研究对C9orf140进行敲降,结果显示下调C9orf140后,SIRT1的蛋白水平下降,然后通过泛素化实验、MG132和CHX实验发现C9orf140抑制了SIRT1通过蛋白酶体途径降解,延长SIRT1蛋白的半衰期,进而稳定SIRT1的蛋白水平。另外,本研究通过对C9orf140质谱结果的分析,结合敲降实验,发现C9orf140调控SIRT1蛋白水平可能依赖于与C9orf140互作的去泛素化酶USP34。为了确认C9orf140是否通过SIRT1来调控细胞增殖。通过敲降C9orf140或SIRT1的实验,发现SIRT1底物c-Myc的下游基因Cyclin B1蛋白表达下降,这提示C9orf140通过稳定SIRT1的蛋白水平来影响Cyclin B1的表达,进而参与细胞周期进程并调控细胞增殖。本研究利用流式细胞仪检测敲降C9orf140对细胞周期的影响,结果显示,下调C9orf140诱导MCF-7细胞周期阻滞在G2/M期,且过表达SIRT1抑制了敲降C9orf140诱导的周期阻滞效应。本研究首次揭示了C9orf140促进乳腺癌细胞增殖的分子机制:C9orf140通过与SIRT1的相互作用,稳定SIRT1的蛋白水平来调控细胞周期蛋白Cyclin B1的表达,进而通过促进乳腺癌细胞周期进程来促进细胞增殖。研究结果表明C9orf140可能通过促进细胞增殖来促进乳腺癌的发生,其有望成为靶向治疗乳腺癌的新靶点。