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幽门螺杆菌是定植于人胃黏膜、并引起部分感染者胃十二指肠疾病的革兰氏阴性细菌。研究显示其基因多态性与致病多样性有关。H.pylori vaeh基因的表达产物VacA蛋白能引起上皮细胞空泡变性,并且vacA基因存在不同的基因表现型,即vacA基因有sla、slb、s2三种不同的信号序列和m1、m2两种不同的中间区的等位基因变异,这些等位基因的嵌合体使得H.pylori的VacA蛋白的毒力不同,致病力的不同。H.pylori的cagA基因,编码的CagA蛋白,易位进入宿主胃上皮细胞,参与细胞的信号转导及细胞骨架的重排。最新的研究发现,cagA基因3可变区存在较多的重复序列,从而导致CagA蛋白变亚型的出现,并因而引起细菌毒力(致病力)的不同。研究还发现,cagA基因的3可变区的EPIYA序列,和CagA蛋白的磷酸化有关。因此,本研究通过阐明镇江地区分离的H.pylori菌株的vaeA基因型、cagA,cagA基因3可变区结构与H.pylori相关性胃肠疾病的关系。
标本采集自在江苏大学附属医院胃镜室检查的胃十二指肠疾病患者的胃黏膜。在微需氧条件下,分离培养H.pylarl临床株,共60株,其中慢性胃炎13株;消化性溃疡38株;胃癌13株。提取菌株基因组DNA后,应用PCR法检测临床分离H.pylori菌株的vaeh基因型、cagA基因;通过对cagA+H.pylori菌株的PCR产物进行转化质粒、测序,研究不同菌株cagA基因3可变区的碱基序列及其氨基酸序列的多态性与临床结果的关系;通过搜索并收集GenBank中已公布的不同地区3-6个H.pylori cagA 3端可变区序列及其氨基酸序列进行比较分析。
结果表明,60株H.pylori临床分离菌株的vacA基因表现型,以sla/m2基因型为主,还有sla/ml、s2/m2型,未见slb、s2/ml基因型;93.3%(56/60)的镇江菌株cagA基因型阳性,在不同病种之间,cagA基因阳性率无统计学差异;所选择的20株、来自不同疾病的H.pylori菌株的cagA基因+的PCR产物测序结果显示:可以根据其序列中的重复序列的数目和主要序列的差异,将cagA基因3可变区分为2个类型:东亚型和西方型,19株镇江菌株表现为东亚型,1株表现为西方型,20株测序的cagA 3可变区的重复序列EPIYA的数目均为3个,EPIYA的数目与临床结果之间没有关联;按GenBank中检索出来的顺序,选择日本菌株cagA 3端可变区序列6个,韩国3个,越南4个,美国3个,哈萨克斯坦3个,印度3个,爱尔兰3个,哥斯达黎加4个。共有49株H.pylori cagA 3端可变区序列和相应的CagA蛋白氨基酸序列,通过序列分析发现CagA蛋白的氨基酸序列可分为具有明显地域特征的东亚型和西方型两类:部分东亚型菌株表现出西方型变异:87.4%的菌株具有3个串联排列的EPIYA基序:新发现1条具有区域特征的含有3个氨基酸的序列。
本论文获得如下的结论:1.镇江地区H.pylori菌株的vacA基因型有sla/ml、sla/m2、s2/m2型,以sla/m2为主,没有s2/ml、slb基因型; 2.镇江地区H.pylori菌株的cagA检出率为93.3%,与国内的报道相似。3.cagA基因型、vacA基因型的检出率在各疾病组间无显著差异; 4.镇江地区H.pylori菌株的cagA基因3可变区主要表现为东亚型,与日本、韩国菌株相似;5.中国镇江地区的cagA基因3可变区的EPIYA序列的数目多为3个;6.cagA基因3可变区的类型95.0%(19/20,95.0%)为东亚型,极少数菌株表现为西方型(1/20,5.0%);7.东亚菌株可以根据Yamaoka的方法进行分型,且都为A型,西方型菌株则不能按此方法进行分型。