目的： 检测MMP-2、9在波浪床组及对照组PU患者伤口渗液及组织中的表达，并结合患者临床疗效进行分析，以期揭示MMP-2、9在PU不同时期的表达及其与PU愈合的关系，同时观察波浪床综合疗法的临床效果；原代培养人成纤维细胞，进行药物干预，观察庆大霉素、双氧水及碱性成纤维细胞生长因子对成纤维细胞及其MMP-2、9表达的影响，为PU的治疗提供更多的理论依据。 方法： 本实验分两部分进行。第一部分：收集2004年6月～2005年12月入住中山大学附属第一医院急诊观察区、急诊重症监护病房、内科重症监护病房、神经内科、骨科Ⅲ-Ⅳ期骶部PU患者24例，分为波浪床组及对照组。采用明胶酶谱及RT-PCR方法检测两组患者伤口渗液中MMP-2、9蛋白水平及组织中MMP-2mRNA的表达，研究随着PU的愈合，MMP-2、9表达水平的变化情况，以了解MMP-2、9与PU愈合的关系及波浪床综合疗法治疗PU的效果。第二部分：原代培养人成纤维细胞，绘制其生长曲线，通过MTT比色方法，检测不同浓度庆大霉素、双氧水及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对细胞生长的影响，采用明胶酶谱及RT-PCR方法分别检测与有效浓度药物共孵育24h后细胞上清中MMP-2、9蛋白及细胞中MMP-2mRNA的表达，以期指导PU的临床治疗。 结果： 1、PushTool评分的变化：两组患者分别于第1、7和21天行PushTool评分，评分结果随治疗时间呈逐渐下降趋势。其中波浪床组患者第1、7、21天评分结果两两相比均有统计学意义(P＜0.05)，第7天时评分结果已较第1天明显下降。对照组患者第1天与第7天评分结果无统计学意义(P＞0.05)，第1、7天与第21天评分结果相比差异均有统计学意义(P＜0.01)，说明对照组患者第21天时评分结果才出现明显下降。两组患者评分结果比较，第1、7天差异无统计学意义(P＞0.05)，而第21天时差异有统计学意义(P＜0.05)，说明波浪床组第21天时评分结果较对照组明显下降。 2、分析PU患者伤口渗液中MMP-2、9蛋白与相应PushTool评分的相关性：取两组患者第1、7、21天MMP-2、9比活结果与相应PushTool评分结果作散点图，发现随着评分结果的下降，MMP-2、9比活结果也逐渐下降，两者呈线性正相关，计算Pearson相关系数(r)分别为0.842和0.866，P=0。说明PU患者伤口渗液中MMP-2、9比活与PushTool评分呈高度正相关。 3、MMP-2、9在波浪床及对照组不同时期表达的差异：MMP-2、9比活随治疗时间而逐渐下降。波浪床组患者第1、7、21天MMP-2、9比活两两相比差异均有统计学意义(P＜0.05)，说明第7天时，MMP-2、9比活较第1天已有明显下降。对照组第1天MMP-2、9比活与第7天相比差异无统计学意义(P＞0.05)，而第1、7天与第21天相比具有统计学意义(P＜0.05)，说明对照组在第21天时MMP-2、9比活才有明显下降。两组患者MMP-2、9比活结果第1天相比差异无统计学意义(P＞0.05)，第7、21天时两组相比差异均具有统计学意义(P＜0.05)，说明与对照组相比，波浪床组MMP-2、9比活在第7天时有明显下降。 4、波浪床及对照组PU患者创缘组织MMP-2mRNA的表达情况：波浪床组PU患者第1天MMP-2mRNA表达水平(MMP-2/β-actin)为1.43±0.20，第21天为0.43±0.11；两者相比差异具有统计学意义(P＜0.01)。对照组第1天为1.33±0.17，第21天为0.61±0.20；两者相比差异也具有统计学意义(P＜0.01)。表明两组患者MMP-2mRNA表达水平在第21天时均有明显下降。两组患者第1天MMP-2mRNA表达水平差异无统计学意义(P＞0.05)，但第21天时两组比较差异具有统计学意义(P＜0.05)，说明与对照组相比，波浪床组MMP-2mRNA表达水平在第21天时明显下降。 5、庆大霉素、双氧水及bFGF对成纤维细胞生长的影响：经MTT比色法，得知庆大霉素、双氧水抑制成纤维细胞的生长，而bFGF则促进成纤维细胞的生长。庆大霉素、双氧水及bFGF有效浓度分别为：0.8mmol/l、0.1mmol/1和5ng/ml。 6、庆大霉素、双氧水及bFGF对MMP-2、9蛋白表达的影响：与对照组相比，有效浓度的庆大霉素、双氧水与成纤维细胞共孵育24h后细胞上清液中MMP-2、9活性明显减弱，MMP-9条带消失、MMP-2比活分别下降67.6％和83.5％，而bFGF与成纤维细胞共孵育24h后，细胞上清液中MMP-2无明显变化仅上调1.65％，MMP-9上调了19.8％。 7、成纤维细胞MMP-2mRNA水平的变化：与对照组相比，与庆大霉素、双氧水共孵育后细胞MMP-2mRNA表达水平有所下降，MMP-2mRNA表达水平(MMP-2/β-actin)分别下调15.75％和36.5％，而bFGF组仅下降1.3％。 结论： 1、MMP-2、9可以作为监测PU愈合情况的生化标记物，提示MMP-2、9可能成为治疗PU的生物靶点。 2、波浪床综合疗法可以有效地防治PU。 3、庆大霉素及双氧水对成纤维细胞的增殖有抑制作用，同时可抑制MMP-2、9的分泌。因而当PU未合并感染时，应避免使用此类药物。 4、bFGF既可促进成纤维细胞的生长，又对MMP-2、9的表达影响较小，故在PU早期即可考虑使用bFGF，以加速创面的愈合。