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目的：构建miR-494慢病毒表达载体及探讨miR-494对肺癌细胞株的增殖、侵袭、迁移等功能研究以及与E2F1的调控关系。
方法：⑴根据GenBank提供的miR-494基因的序列，设计一对含有BamH/XhoⅠ酶切位点特异性引物，用PCR法扩增目的基因的片段，目的基因同源重组入表达载体，转化到大肠杆菌E.coli.DH5α中扩增，挑取平板上长出的转化子进行菌落PCR鉴定，接种阳性克隆并进行序列测定，测序没有问题的，再接种抽提质粒。之后分别用三种质粒（重组质粒:pNL-EGFP/CMV/WPREdU3;包装质粒:pCD/NL-BH*DDD;膜蛋白表达质粒: pLTR-G）进行慢病毒的包装。命名为:pGIPZ-miR-494-eGFP，空载的命名为:pGIPZ-eGFP。并进行慢病毒的浓缩及纯化，最后进行病毒滴度的测定。将慢病毒颗粒感染A549细胞，并将实验的细胞分为三个组，带有目的基因的miR-494组，带有空载病毒的NC组，和不感染病毒的CON组，将3组细胞进行提取细胞总RNA，反转录成cDNA。以各组cDNA为模板，利用两步法进行Real-Time PCR来检测感染的效率。⑵运用细胞平板克隆形成实验了解细胞增殖的能力，运用transwell了解细胞的迁移能力。⑶通过染色质免疫共沉淀(chip)实验验证两者间是否存在调控关系。
结果：①目的基因与慢病毒载体连接成功。共转染293T细胞包装病毒与浓缩后滴度达1.02*108TU/ml，并转染到肺腺癌细胞株A549上，利用流式细胞仪分选出的绿色荧光细胞，通过Real-Time PCR检测结果显示miR-494慢病毒表达载体感染的A549细胞高于对照组达10倍以上。②细胞平板克隆结果显示:干扰的细胞克隆形成能力较空载对照单克隆细胞弱，表明miR-494过表达的A549细胞体外增殖能力减弱。和空白对照与空载细胞在克隆形成率[58.00％±4.96）和（60.50％±5.35）]相比，干扰的A549细胞的克隆形成率明显减少（28.00％±3.62）。差异有统计学意义(P＜0.05)。③Transwel小室实验结果显示:三组细胞运动能力的差异具有显著性。与未干扰的A549细胞和空载细胞相比，干扰的A549细胞穿过膜的细胞数显著减少，其运动能力明显降低（138.3±10.41 vs133.3±5.77 vs77.3±3.06;P＜0.05）。④Chip实验结果显示:在A549细胞中，E2F1通过与预测的四个结合位点从而调控mir-494的启动子区，从而对mir-494进行调控。
结论：成功构建了pGIPZ-miR-494-eGFP慢病毒表达载体，转染到A549细胞中过表达，从而抑制细胞的增殖、迁移。并发现了与E2F1的调控关系。