毛竹根区土壤与内生细菌多样性及促生细菌筛选

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:tianaiguo
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通过高通量454焦磷酸测序技术,对毛竹不同生长期根区土壤细菌和内生细菌的多样性开展了研究。结果表明:从14个毛竹根区土壤及毛竹组织样本中共获得250,237条原始序列,采用RDP classifier进行分类地位的鉴定发现这些序列属于细菌的26个目:放线菌目、立克次氏体目、伯克氏菌目、肠杆菌目、根瘤菌目、假单胞菌目、乳酸杆菌目、红螺菌目、酸杆菌目、鞘脂单胞菌目、Solibacterales、黄单胞菌目、酸微菌目、奈瑟菌目、芽孢杆菌目、巴斯德氏菌目、黄杆菌目、粘球菌目、柄杆菌目、Solirubrobacterales、Saprospirales、梭菌目、军团菌目、拟杆菌目和暂定的Ellin329、Ellin6513 目。其中放线菌目(Actinomycetales)、根瘤菌目(Rhizobiales)和Ellin6513目在毛竹根区土壤样本中占绝对优势。肠杆菌目(Enterobacteriales)广泛存在于各毛竹组织中。毛竹不同生长期根区土壤细菌群落结构变化不大,没有随着毛竹的生长发育发生较大的变化,毛竹竹鞭内生细菌群落结构与毛竹根区土壤样本细菌群落比较接近。毛竹竹笋内生细菌群落与毛竹竹杆内生细菌群落及根区土壤细菌群落结构均有较大差异。随着毛竹不断生长发育,毛竹内生细菌群落结构有所变化。采用传统的细菌分离培养方法,结合16S rDNA序列分析对毛竹可培养内生细菌的多样性研究结果表明,从武夷山、将乐、长汀毛竹的根、鞭、杆、叶部组织中分离到82株内生细菌,归属于26属,47种。不同地域及毛竹不同组织的可培养内生细菌组成存在较大差异。其中,武夷山样品以芽孢杆菌属、葡萄球菌属、苍白杆菌属为主要优势菌群,将乐样品以芽孢杆菌属、葡萄球菌属和短小杆菌属为主要优势菌群,长汀样品以产碱杆菌属、假单胞菌属、葡萄球菌属为主要优势菌群。研究结果表明毛竹具有多样性及其丰富的内生细菌资源。对内生细菌进行解磷解钾固氮活性筛选结果表明,从82株毛竹内生细菌中筛选出20株具有解磷解钾固氮活性的内生细菌,其中,具有较高解有机磷活性的菌株为肠杆菌属CT-B09-2、不动杆菌属WYS-A01-1和芽孢杆菌属JL-B06,分解圈直径/菌落直径(D/d)值分别为5.05、4.19和2.95,其解磷活性分别达到81.77mg/L、77.85mg/L和63.69mg/L;芽孢杆菌属JL-B06、肠杆菌属CT-B09-2和不动杆菌属WYS-A01-1的解无机磷活性较高,分解圈直径/菌落直径(D/d)值分别为2.34、2.12和1.82,其解磷活性分别达到30.58mg/L、38.89mg/L和48.35mg/L;假单胞菌属CT-B21、伯克氏菌属WYS-A03-1 和芽孢杆菌属JL-B06的解钾活性最高,分解圈直径/菌落直径(D/d)值分别为2.37、4.84和4.33,其解钾活性分别达到2.81mg/L、2.54mg/L和2.46mg/L;具有“++”以上固氮活性的内生细菌为9株,其中具有较强解固氮活性的菌株分别为肠杆菌属CT-B09-2、泛菌属JL-D02、短杆菌属WYS-C01-1、芽孢杆菌属JL-B06等。本研究筛选出了具有较强解磷解钾固氮活性的内生细菌菌株为CT-B09-2、JL-B06、WYS-A01-1。16S rDNA序列分析表明,20株解磷解钾固氮细菌归属于10属,14种,以产碱杆菌属(Alcaligenes)、肠杆菌属(En terobac ter)和芽孢杆菌属(Bacillus)为主,毛竹具有多样性极其丰富的促生内生细菌资源。促生菌株(CT-B09-2、JL-B06、WYS-A01-1)在毛竹体内定殖的研究结果表明,采用利福平标记法获得的促生菌突变菌株,通过灌根法和叶腋注射法接种盆栽毛竹幼苗,分别在3天和7天采集毛竹根、茎、叶部组织分离回收促生菌株突变体并进行鉴定。结果表明,促生菌株可以在毛竹体内存活并定殖在根、茎、叶等组织。内生细菌对毛竹促生作用研究结果表明,促生菌株能够提高毛竹光合作用,经内生菌处理后毛竹体内光合速率、蒸腾速率和气孔导度均高于对照;能提高毛竹体内的叶绿素含量;能够增强毛竹体内的保护酶活性,从而改善毛竹对不良环境条件的反应。经促生菌株处理毛竹后,除丙二醛(MDA)含量低于对照外,毛竹体内过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)活性、可溶性蛋白含量和可溶性糖含量均高于对照。
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