HBV-B、C基因型真核表达载体的构建

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sunweidong123
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目的:构建HBV-B和C基因型重组真核表达载体,检测在HepG2细胞中HBsAg、HBeAg的表达和HBV DNA复制水平并进行比较,为进一步研究HBV-B和C基因型的结构与功能,及其对HCC影响研究奠定良好的基础。  方法:以重组克隆载体pUC-19-HBV-B、pUC-19-HBV-C为模版,采用PCR扩增全基因组HBV DNA,并将其正确插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,经EcoRⅠ或/和HindⅢ酶切及测序后,用Lipo2000瞬时转染HepG2细胞,利用ELISA分别于转染后24h、48h、72后,检测HBsAg和HBeAg的表达,用RT-PCR检测转染后48h、72h HBV DNA复制水平,并非参数检验和T test对各基因型的表达水平进行比较分析。  结果:经过酶切及测序测序,证实真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBV-B、pcDN-A3.1(+)-HBV-C成功构建:用ELISA方法检测HBsAg、HBeAg于转染后的表达,结果显示C型HBsAg和HBeAg的表达水平明显高于B型(p<0.01),用RT-PCR对转染后HBV DNA复制水平进行了检测,发现C型比B型HBV DNA有较高的复制水平(p<0.01)。  结论:成功构建了HBV-B、HBV-C基因型重组表达载体,并能在HepG2细胞中表达,为进一步研究HBV-B、HBV-C的结构与功能,基因表达与调控,及其对HCC影响的研究奠定基础。
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