渤海海域抗菌活性微生物的筛选和鉴定

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在不同温度和pH条件下,利用不同营养物浓度的海洋细菌、真菌、放线菌分离培养基,从渤海海水样品中筛选到87株海洋细菌、127株海洋真菌(均为霉菌)和14株海洋放线菌。 28℃、160r/min条件下对所筛的87株海洋细菌进行液体发酵,利用牛津杯法对发酵液进行抗细菌活性检测,研究结果表明:28株细菌对大肠杆菌(Escherichia coli)或金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)有不同程度的抑制作用,阳性筛选率为32.2%;8株细菌可抑制上述2种指示菌,阳性筛选率为9.2%,A49菌株的活性最强。以玉蜀黍平脐蠕孢菌(Bipolaris maydis)、大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)、麦根腐平脐蠕孢菌(Bipolaris sorokiniana)、大豆尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、苹果黑腐皮壳菌(Valsa mali)、茄链格孢菌(Alternaria solani)、烟草疫霉菌(Phytophthoraparasiticavar nicotianae)和立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)等8种植物病原真菌为指示菌,采用滤纸片扩散法对28株抗性细菌进行活性检测,结果均呈阴性。通过对菌株A49进行菌落形态、个体形态观察以及生理生化试验,依据《伯杰氏细菌鉴定手册》可知菌株A49属于芽孢杆菌科(Bacillaceae),芽孢杆菌属(Bacillus sp.)。对其16S rDNA进行系统发育分析,确定其为芽孢杆菌属,暂命名为Bacillius sp.A49。 以8种植物病原真菌为指示菌,采用双向培养法对116株常温海洋霉菌进行抗菌活性初筛,结果得到41株霉菌对植物病原真菌有不同程度的抑制作用。根据《真菌鉴定手册》,对其中抗菌谱较广的4株霉菌进行了地位分类,确认32#霉菌为曲霉属,40#霉菌为耳霉属,67#和18#霉菌为青霉属。利用滤纸片扩散法对41株活性霉菌进行复筛,得到1株抗菌谱广、活性强的67#菌株,其他菌株没有检测到活性。利用生长速率法检测67#菌株发酵液对B.maydis、V.dahliae、F.oxysporum、V.mali、P.nicotianae和A.solani等6种指示菌的抑制率和EC50,抑制率分别为40.0%、30.6%、36.7%、23.5%、30.0%和26.3%,EC50分别为3.1615、3.5751、3.1623、4.8686、4.3914和4.7676。以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为指示菌,利用牛津杯法对41株活性霉菌进行抗细菌活性检测,没有筛选到既抑制真菌又抑制细菌指示菌的活性霉菌菌株。
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