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本文以长春花(Catharanthus roseus(L．)G．Don．)植物幼苗为材料，利用Gateway克隆技术对其萜类吲哚生物碱(Terpene indole alkaloids，TIAs)生物合成途径中编码关键酶的基因进行大规模克隆，获得相关基因的入门克隆和表达克隆，制备相应的抗体。并对这些基因的mRNA表达水平进行检测。所得结果如下：1．以长春花植物幼苗中提取的总RNA为模板，反转录生成cDNA，经两步Gateway-PCR法获得长春花TIAs类化合物生物合成途径中编码关键酶DXS、DXR、G10H、SLS、TDC、STR和DAT的目的基因(dxs、dxr、g10h、sls、tdc、str和dat)的全长序列。2．利用Gateway克隆技术通过BP重组反应将目的基因插入到入门载体(pDONR201)中，构建目的基因的入门质粒，筛选出阳性克隆并通过测序验证。3．通过LR重组反应将目的基因从入门载体上转移到表达载体(pETG10A／20A／30A)，导入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)的感受态细胞中。通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达，经SDS-PAGE检测，表明重组的分别含有dxr、sls、str和g10h基因的表达质粒的大肠杆菌菌株均有目的蛋白的表达。4．利用Ni-TED树脂分别对表达量较高的DXR、SLS和STR融合HIS标签的蛋白进行纯化，纯化后的蛋白经SDS-PAGE检测没有杂带，用Brad-ford法对纯化后的蛋白进行定量，结果表明所得蛋白已达到制备抗体的要求，目前抗体制备正在进行中。5．对这些基因在长春花幼苗中mRNA表达水平的Northern杂交实验显示dxr、sls、str和tdc基因在根、茎、叶、花和果实中均有表达，并且从总体上看根和幼叶中的表达量相对高些，老叶中的表达量相对低一些；但是没有检测到目的基因g10h、dxs和dat相应的mRNA杂交信号，原因可能是与所选的植物材料的生长阶段和生长环境有关。