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蜜蜂是重要的授粉昆虫,对整个自然生态系统有着不可取代的作用。蜜蜂黑蜂王台病毒(black queen cell virus, BQCV)、蜜蜂残翅病病毒(deformed wing virus, DWV)、蜜蜂囊状幼虫病毒(sacbrood virus, SBV)是常见并且对蜜蜂危害严重的蜜蜂病毒。常用的检测方法有分子生物学、症状、免疫学等。但这些方法在仪器、技术等方面有特别的要求,实用性不强。因此针对BQCV、DWV、SBV建立一种快速、敏感性高、特异性强、无需专用设备的实用性检测方法是有必要的。环介导等温扩增技(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)在等温条件下,仅需要一个水浴锅在1h内就可完成反应,通过荧光染料即可观察结果,具有快捷、简便的特点。本研究建立并优化了BQCV-LAMP、DWV-LAMP、SBV-LAMP,验证特异性并与常规PCR技术对比验证敏感性,并分析其与PCR检测临床样本的差异。主要研究结果：1)建立并优化了BQCV-LAMP、DWV-LAMP、SBV-LAMP,优化后的BQCV-LAMP体系外、内引物比为1：3,甜菜碱浓度为0.8mmol/L, Mg2+浓度为2.0 mmol/L,在63℃条件下反应45 min; SBV-LAMP体系外、内引物比为1：2,甜菜碱浓度为0.6 mmol/L,Mg2+浓度为2.0 mmol/L,在63℃条件下反应45 min；DWV-LAMP体系外、内引物比为1：4,甜菜碱浓度为0.6 mmol/L, Mg2+;浓度为2.0 mmol/L,在63℃条件下反应60 min。2) BQCV-LAMP、DWV-LAMP、SBV-LAMP均只有对BQCV、DWV、SBV出现多梯形条带,特异性好。BQCV-LAMP的灵敏度可达86龟的RNA模板,常规PCR 8.6 pg的RNA模板,说明BQCV-LAMP的灵敏度比BQCV-PCR的要高100倍；SBV-LAMP的灵敏度可达93 fg的RNA模板,常规PCR 0.93 pg的RNA模板,说明SBV-LAMP的灵敏度比SBV-PCR的要高10倍；DWV-LAMP的灵敏度可达8.9 fg 的RNA模板,常规PCR 8.9 pg的RNA模板,说明DWV-LAMP的灵敏度比DWV-PCR的要高100倍.3)临床检测：用BQCV-LAMP方法检测中华蜜蜂和意大利蜜蜂样本各20份,其中阳性数量分别为5和15,阳性检测率分别为25%和75%；PCR方法检测同样中华蜜蜂和意大利蜜蜂样本,阳性数量分别为3和11,阳性检测率分别为15%和55%。SBV-LAMP方法检测20份中华蜜蜂样本,阳性数量分别为12,阳性检测率分别为60%；PCR检测同样20份中华蜜蜂样本,阳性数量分别为9,阳性检测率分别为45%。DWV-LAMP方法检测20份意大利蜜蜂样本,阳性数量分别为11,阳性检测率分别为55%；DWV-PCR方法检测同样20份意大利蜜蜂样本,阳性数量分别为7,阳性检测率分别为35%。BQCV-LAMP、DWV-LAMP、SBV-LAMP三种检测方法均比相应的常规PCR方法检测率高。