论文部分内容阅读
目的:我们前期研究发现,改良小肠旷置术(侧侧吻合加近端肠袢捆扎法小肠旷置术,Side-to-side jejunoileal bypass plus proximal loop ligation,SSJIBL)具有显著的减重和降糖疗效,然而具体哪一节段的SSJIBL治疗糖尿病(Diabetes mellitus,DM)效果最佳以及SSJIBL治疗DM的确切机制还不十分明确。本研究将以SSJIBL为手术模型,对非肥胖型糖尿病大鼠(Non-obese diabetic rat,NODR)分别施以袖状胃切除术(Sleeve gastrectomy,SG)、十二指肠-空肠旁路术(Duodenal-jejunal bypass,DJB)、近端小肠旷置术(Proximal small intestinal bypass,PSIB)、中段小肠旷置术(Mid small intestinal bypass,MSIB)和远端小肠旷置术(Distal small intestinal bypass,DSIB)五种不同的手术,来系统探讨不同节段的SSJIBL治疗NODR的疗效及机制,为临床上应用和改进SSJIBL治疗DM提供理论依据。方法:选取6-8周龄SPF级雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠100只,体重240-280g,采用腹腔内一次性注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ,60mg/kg)的方法建立NODR大鼠模型,造模成功一周后选取60只成模大鼠随机分配6组,每组10只,即SG组、DJB组、PSIB组、MSIB组、DSIB组和Sham组。分别在特定时间节点检测每组大鼠的体重、24小时进食量、空腹血糖(Fasting blood glucose,FBG)、口服葡萄糖耐量试验(Oral glucose tolerance test,OGTT)和胰岛素耐量试验(Insulin tolerance test,ITT)。6周后收集相关标本,检测每组大鼠血清肝肾功能、电解质、胆汁酸和血脂水平;采用酶联免疫吸附(Enzyme linked immune-sorbent assay,ELISA)方法测定血清中胰岛素(Insulin)、饥饿素(Ghrelin)、瘦素(Leptin)及胰高血糖素样肽-1(Glucagon-like peptide-1,GLP-1)水平;利用HE染色观察每组大鼠术后肝脏的形态学改变(脂肪变、纤维化及肝硬化等);用免疫荧光方法评估每组大鼠胰岛β细胞分泌胰岛素的情况。结果:1、各组大鼠手术时间及存活率:Sham组是人为控制时间,不计统计结果。PSIB、MSIB和DSIB三组手术时间均低于DJB和SG两组(P<0.05)。SG组在术后1周死亡1只,DSIB组在术后2周死亡1只,Sham组在术后2周死亡1只,其余大鼠均正常存活至实验结束。2、体重和24小时进食量:各手术组在各时间节点体重较Sham组无变化(P>0.05)。术后2-6周PSIB、MSIB、DSIB和DJB四组24小时进食量低于Sham组(P<0.05),而SG组与Sham组无统计学差异(P>0.05);PSIB、MSIB和DSIB三组24小时进食量在术后2-6周低于SG组(P<0.05),而PSIB、MSIB和DSIB三组间无统计学差异(P>0.05)。3、FBG水平:PSIB、MSIB和DSIB三组FBG水平在术后2-6周低于Sham组(P<0.05),SG组FBG水平在术后2-4周低于Sham组(P<0.05),但在5周后又无统计学差异(P>0.05),DJB组和Sham组无统计学差异(P>0.05);PSIB、MSIB和DSIB三组FBG水平在术后2-6周低于DJB组(P<0.05),PSIB组FBG水平在术后4-6周低于SG、MSIB和DSIB三组(P<0.05)。4、OGTT:术后2周,PSIB、MSIB和DSIB三组血糖在灌胃后60min后低于Sham组(P<0.05),SG组血糖在90min后低于Sham组(P<0.05),而DJB组较Sham组无统计学差异(P>0.05);PSIB、MSIB和DSIB三组血糖和SG组无统计学差异(P>0.05),PSIB、MSIB和DSIB三组间无统计学差异(P>0.05)。术后6周,PSIB、MSIB和DSIB三组血糖在灌胃后15min后低于Sham组(P<0.05),而DJB和SG两组较Sham组无统计学差异(P>0.05);PSIB、MSIB、DSIB、DJB和SG五组间亦无统计学差异(P>0.05)。5、ITT:术后2周,注射胰岛素后PSIB、MSIB和SG三组大鼠血糖下降速率在30min后高于Sham组(P<0.05),DSIB和DJB两组大鼠血糖下降速率与Sham组无统计学差异(P>0.05);PSIB、MSIB和SG三组间无统计学差异(P>0.05)。术后6周,注射胰岛素后PSIB、MSIB和SG三组大鼠血糖下降速率在60min后高于Sham组(P<0.05),DSIB和DJB两组大鼠血糖下降速率与Sham组无统计学差异(P>0.05),各手术组间亦无统计学差异(P>0.05)。6、肝肾功能、电解质、胆汁酸和血脂水平变化:术后6周,各手术组肝肾功能和电解质较Sham组无统计学差异(P>0.05);各手术组总胆汁酸水平均低于Sham组(P<0.05),DSIB组总胆汁酸水平低于与DJB和SG组(P<0.05);各手术组较Sham组在TG、HDL、LDL和FFA水平变化上无统计学差异(P>0.05),DSIB和MSIB组的CHOL水平低于Sham组(P<0.05)。7、血清激素水平变化:术后6周,PSIB组Insulin水平高于Sham组(P<0.05),其余手术组较Sham组无统计学差异(P>0.05);各手术组Ghrelin水平均低于Sham组(P<0.05);SG、PSIB、MSIB和DSIB四组GLP-1水平均高于Sham组(P<0.05),而DJB组与Sham组间无统计学差异(P>0.05);PSIB组Leptin水平高于Sham组(P<0.05),其余手术组较Sham组无统计学差异(P>0.05),PSIB组Leptin水平高于DJB、SG、MSIB和DSIB组(P<0.05)。8、肝脏形态学变化:术后6周镜下观察各组肝脏HE染色,各组肝脏形态结构相对完好,无明显脂肪变、纤维化及肝硬化病变。9、胰腺免疫荧光:术后6周,PSIB组胰岛素免疫荧光光密度值(Immunofluorescence optical density,IOD)高于Sham组(P<0.05),其余手术组与Sham组无统计学差异(P>0.05)。结论:1、三种SSJIBL术式都能明显改善NODR糖代谢,以PSIB术式效果最佳。2、PSIB术式改善NODR糖代谢的作用优于DJB和SG两种术式。3、减少进食量和促进GLP-1分泌是SSJIBL改善NODR糖代谢的两种重要途径。4、诱导胰岛β细胞增殖,促进胰岛素分泌可能是PSIB术式改善NODR糖代谢的重要机制。