【摘 要】
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目的:制备特异性强,抑制率高的辣椒素(Capsaicin)单克隆抗体(m Ab),用于胶体金侧向免疫层析试纸条的研制,并应用于植物油中辣椒素的现场快速检测。方法:通过化学方法将辣椒素半抗原分别与BSA和OVA偶联,得到辣椒素-BSA与辣椒素-OVA两种完全抗原;以辣椒素-BSA为免疫原免疫BALB/c小鼠,取免疫后的小鼠脾脏细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过有限稀释法筛选得到稳定分泌针对辣椒素的
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目的:制备特异性强,抑制率高的辣椒素(Capsaicin)单克隆抗体(m Ab),用于胶体金侧向免疫层析试纸条的研制,并应用于植物油中辣椒素的现场快速检测。方法:通过化学方法将辣椒素半抗原分别与BSA和OVA偶联,得到辣椒素-BSA与辣椒素-OVA两种完全抗原;以辣椒素-BSA为免疫原免疫BALB/c小鼠,取免疫后的小鼠脾脏细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过有限稀释法筛选得到稳定分泌针对辣椒素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备并纯化腹水型单克隆抗体,鉴定其特异性、IC50、浓度、纯度、效价等特性。将辣椒素单克隆抗体标记于胶体金颗粒(Au nanopaticles,Au NPs),辣椒素-OVA完全抗原包被于检测线(T线)上,基于竞争法侧向免疫层析策略,建立辣椒素竞争侧向免疫层析试纸条并对其进行性能与应用评价。结果:筛得3株特异针对辣椒素的单克隆抗体杂交瘤细胞株;以特异性和亲和力最佳的5E12单克隆抗体为基础,建立了辣椒素胶体金侧向免疫层析试纸条检测方法,该方法灵敏度为10 ng/m L,反应时间10 min,特异性良好,可用于检测食用油10倍浓缩提取液,并与高效液相色谱法(HPLC)检测结果的阳性符合率为100%、阴性符合率为88.8%,可以满足“地沟油”现场快速检测的要求。结论:成功制备了辣椒素单克隆抗体,并研制了胶体金侧向免疫层析试纸条,该方法灵敏度高、特异性强、操作简便、反应快速,符合“地沟油”食品安全现场快速鉴别检测的要求。
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