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目的肺脏作为糖尿病损害的靶器官本世纪70年代以来才逐渐被大家关注,广泛涉及肺功能、生化代谢、肺组织病理等诸多方面,其中肺局部防御功能降低所致下呼吸道感染最为常见。Toll样受体(Toll like receptors,TLRs)是近年来新发现的一种同源于果蝇Toll的蛋白分子,在对抗细菌的先天免疫过程中发挥了关键的作用,并且与糖尿病密切相关,现已日益受到关注。TLRs能够对病原体识别、结合,引发一系列信号间的转导,促进各种炎性介质的释放。在这个大家族中TLR2和TLR4最为受关注,TLR2能识别许多病原菌相关分子模式,包括革兰氏阳性球菌的肽聚糖,此次实验我们研究了肽聚糖刺激下TLR2在正常大鼠及糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞表达,希望能进一步了解糖尿病病人肺部免疫机能变化的机制,以期为感染和糖尿病的关系提供进一步的证据,并为糖尿病感染的治疗和控制提供新的作用点。材料与方法一、材料(一)实验动物:健康雄性Wistar大鼠32只,SPF级,鼠龄12周,体重(200±20)克。(二)仪器与试剂:Universal 32R离心机、血糖仪、链脲佐菌素(STZ)、肽聚糖(PGN staphylococcus aureus)、兔抗鼠TLR2二、方法(一)动物模型制备及分组:将32支雄性健康Wistar大鼠,体重约200克左右,随机分为4组:正常对照组(A组,n=8),糖尿病组(B组,n=8),正常+PGN组(C组,n=8),糖尿病+PGN组(D组,n=8)。糖尿病组一次性腹腔注射链脲佐菌素60mg/kg体重,正常对照组注射同等剂量枸橼酸-枸橼酸钠缓冲溶液,72小时后随机血糖≥16.67mmol/L为糖尿病模型成功,以后每周复查1次血糖,连续观察4周。(二)肺泡巨噬细胞的获取及培养:大鼠用水合氯醛麻醉成功后,经气管插管行支气管肺泡灌洗,回收BALF,巨噬细胞培养,C组及D组加入终浓度为10ug/ml PGN孵育。(三)免疫细胞化学染色:采用免疫细胞化学染色SABC法,染色时兔抗鼠TLR2的浓度为1:200。阳性反应为胞膜和胞浆呈棕黄色着色。(四)TLR2 mRNA表达测定(五)统计分析:采用SPSS13.0统计软件处理,实验数据用(?)±s表示,各组间指标比较用双因素双水平析因分析,P＜0.05为差异有统计学意义。实验结果一、免疫细胞化学结果正常组大鼠肺泡巨噬细胞TLR2表达,以胞浆及胞膜为主呈较淡的棕黄色改变;糖尿病组细胞TLR2在上述部位表达渐增多,颜色稍加深;正常+PGN组及糖尿病+PGN组细胞的胞浆及胞膜呈深棕黄色改变,部分细胞变性坏死。平均光密度值:正常组0.1146±0.002,糖尿病组0.1731±0.011,正常+PGN组0.2059±0.011,糖尿病+PGN组0.2931±0.017。二、TLR2 mRNA表达正常组0.898±0.084,糖尿病组1.202±0.07,正常+PGN组1.628±0.11,糖尿病+PGN组2.307±0.13。糖尿病因素及肽聚糖因素导致肺巨噬细胞内TLR2表达增高,P＜0.001,糖尿病及肽聚糖有较明显的主效应以及交互作用。结论糖尿病可促进大鼠肺泡巨噬细胞TLR2表达,使机体处于促炎症状态,将可能导致免疫系统功能紊乱,使机体肺部的免疫防御功能下降。