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卵巢癌是致死率最高的妇科恶性肿瘤。高复发率和复发后的高耐药率是其高死亡率最主要的原因之一。近年来提出的肿瘤干细胞(Cancer stem cells, CSCs)学说认为肿瘤组织由异质性的细胞群体构成；肿瘤组织中存在极少量具有干细胞性质的癌细胞亚群,具有多向分化潜能和无限的增殖及自我更新能力,是肿瘤发生、发展、侵袭、转移、复发、及耐药的决定性因素。CSCs目前已在血液系统肿瘤及乳腺癌、脑肿瘤等实体瘤中相继分离。卵巢癌CSCs的研究相对较迟,其表型还不明确,存在较多争议,耐药等特点的研究尚有待完善。本研究首先以人上皮性卵巢癌细胞系3A0为模型,进行卵巢癌肿瘤干细胞样细胞(Cancer stem cell-like cells, CSC-LCs)的分离、鉴定,明确其细胞标志物；并观察不同浓度下CSC-LCs对化疗药物敏感性的变化。在此研究基础上,对卵巢癌原代标本CSC-LCs进行了初步研究。旨在从CSCs视角,阐明卵巢癌发生和耐药机制,为探索卵巢癌诊治新靶点提供实验证据。第一部分3AO细胞系中卵巢癌CSC-LCs的分离和鉴定目的：从人上皮性卵巢癌细胞系3AO中分离鉴定CSC-LCs,明确其细胞标记物,并对其进行药物敏感性研究。方法：无血清悬浮培养法形成3AO肿瘤细胞球体,流式检测明确其表型,并使用该表型进行流式分选,将收获的细胞进行异种移植成瘤、干细胞标志物检测及分化等鉴定实验,并观察不同浓度下CSC-LCs对泰素和卡铂敏感性的变化。结果：1.3AO细胞亚群可形成能自我更新的悬浮球体；2.3AO球体细胞富集CD44+CD24-表型细胞；3.3AO球体细胞及CD44+CD24-细胞具有高度致瘤性；4. CD44+CD24-细胞可分化为CD44+CD24+细胞；5. CD44+CD24细胞对泰素和卡铂高度耐药。结论：1. CD44+CD24-卵巢癌细胞具有CSC-LCs新的表型特征、自我更新能力及高致瘤能力,且可分化为CD44+CD24+卵巢癌细胞,证实其为卵巢癌CSC-LCs.2. CD44+CD24-卵巢癌细胞对化疗药物具有显著耐药性,卵巢癌的治疗应该靶向CD44+CD24-卵巢癌细胞。第二部分卵巢癌组织和腹水细胞原代标本中CSC-LCs的初步研究目的：证实卵巢癌标本原代培养细胞中卵巢癌CSC-LCs的存在。方法：取新鲜晚期卵巢上皮性癌组织和腹水,经切割、消化、分离等处理后,将获得的单细胞悬液在无血清条件下悬浮培养形成肿瘤细胞球体。收集该原代卵巢癌球体细胞,流式检测明确其表型特点并观察体外分化情况,免疫荧光验证干细胞标志物表达。将卵巢癌球体细胞与其分化细胞比较,观察其对泰素或卡铂的药物敏感性差异。结果：1.卵巢癌组织和腹水细胞体外可形成球体细胞；2.原代卵巢癌球体细胞中富集CD44+CD24-表型；3.原代卵巢癌球体细胞表达干细胞标志物；4.原代卵巢癌CD44+CD24-球体细胞可出现分化；5.原代卵巢癌CD44+CD24-球体细胞对泰素和卡铂高度耐药。结论：上皮性卵巢癌原代细胞经球体细胞培养,富集CD44+CD24-表型,并表达干细胞表型,具有分化能力及显著的化疗药物耐药性,提示来自原代的CD44+CD24-卵巢癌细胞为卵巢癌CSC-LCs。