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研究背景：心肌缺血和心肌梗死的过程中交感神经系统兴奋性增强,缺血心肌组织及血浆中儿茶酚胺类物质增加,过高浓度的去甲肾上腺素(NE)能造成心肌细胞凋亡,过度的细胞凋亡将引起心脏结构改变和功能障碍。实验证明过高浓度的去甲肾上腺素能诱导培养大鼠心肌细胞凋亡,这种作用是通过蛋白激酶A (cAMP-Dependent Protein Kinase, PKA)介导的。P物质(Substance P, SP)属于速激肽(NKs)家族的一员,SP广泛分布于中枢、周围神经系统及心肌组织中,提示SP可能参与心脏的病理或生理功能。研究发现,在心肌缺血和心肌梗死的过程中心肌组织内SP的浓度增高,说明了SP可能参与了体内心肌缺血和心肌梗死的病理生理过程。SP在心肌缺血过程中所起的作用目前还不清楚,因此,我们以体外培养心肌细胞为研究对象,研究SP对NE诱导心肌细胞凋亡的影响及其与细胞内蛋白激酶A (PKA)信号通路的关系。研究目的：观察SP对NE诱导心肌细胞凋亡的影响及SP对NE干预后细胞内PKA活性变化。在离体心肌细胞培养模型上探讨神经肽在神经源性反应和器官损伤／保护中的作用及其机制。试验方法：采用NE与PKA抑制剂(H89)、SP、SP受体拮抗剂(D-SPNE)配伍,形成以下组合：NE (10μmol/L), NE+H89 (30μmol/L), NE+SP (1μmol/L), NE+SP+D-SP(10μmol/L)处理培养的心肌细胞。用末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记(TUNEL)法测定细胞凋亡,观察SP对NE诱导的细胞凋亡的作用同时观察H89对NE诱导细胞凋亡的影响,并且进行比较分析。用PepTag" nonradioactive PKA assay kit测定PKA活性,观察各组药物处理后细胞内PKA活性的变化,并推测PKA活性与细胞凋亡的联系。试验结果：与对照组相比NE能显著增加心肌细胞的凋亡率和细胞内PKA的活性。SP能抑制由NE诱导的细胞凋亡,凋亡率由单用NE处理组的46.3±13.1%降低至23.0%±8.0%(P<0.05)；并且SP可抑制由NE诱发的PKA活性增强。NK1受体拮抗剂[D-Argl, D-Phe5, D-Trp7,9, Leull]-Substance P (D-SP)能够阻断SP抑制凋亡和抑制PKA活性的作用。PKA的特异性抑制剂H-89具有与SP相似的抗凋亡作用。结论：SP通过调节心肌细胞PKA活性,抑制由NE诱导的细胞凋亡。NK1受体参与介导SP的抗凋亡作用。