GFP基因修饰的大鼠骨髓间充质干细胞复合PLGA的形态学观察

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目的观察绿荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)基因修饰的大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone mesenchymal stem cells, rMSCs)与聚丙交酯-乙交酯(Poly Lactic Glycolic Acid, PLGA)膜材料复合培养,及碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)-绿荧光蛋白(GFP)基因修饰的大鼠骨髓间充质干细胞与PLGA支架材料复合培养,为后续种子细胞-基因-支架材料-神经营养因子复合方法构建组织工程化脊髓修复脊髓损伤的可行性提供依据。方法GFP过表达慢病毒载体(lentiviral vectors , lv-GFP)转染的rMSCs-GFP按8000细胞/cm2与PLGA膜材料复合培养为实验组,对照组为普通的培养板上的rMSC-GFP,荧光显微镜下观察细胞的形态学特性,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)测定两组细胞每天的生长增殖情况;流式细胞仪测定PLGA膜材料上第3天rMSCs-GFP的细胞周期,及用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的抗体CD34、CD90和用PE标记的抗CD44、CD106、CD45、CD11b对在膜材料上培养的第3天rMSCs-GFP进行流式细胞鉴定。转染的rMSCs-GFP -bFGF及rMSCs-GFP分别以1.0×105/mL接种于PLGA支架材料复合培养,荧光显微镜下观察细胞与支架材料的的复合培养情况。结果rMSCs-GFP在PLGA膜上贴壁生长,绝大多数rMSCs可见绿色荧光,为成纤维细胞样形态,散在分布,3d时细胞增多,开始变为多角形,7 d时细胞基本铺满膜,多为多角形和短梭形,与普通培养板上细胞相似,细胞的生长增殖在PLGA膜上与培养板上大致相同,细胞周期也大致相同,细胞在PLGA膜上高表达CD90、CD44、CD106。荧光显微镜下GFP-bFGF基因转染细胞在PLGA内生长良好。结论骨髓间充质干细胞是脊髓组织工程适宜的种子细胞,重组GFP的过表达慢病毒感染后的rMSCs与PLGA膜材料具有良好的组织相容性,及重组GFP-bFGF的rMSCs在PLGA支架材料上能良好的生长。可进一步复合方法体外构建组织工程脊髓修复脊髓损伤。
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