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目的：
对两个由纯合子突变导致的遗传性凝血因子Ⅶ（coagulationfactorⅦ,FⅦ）缺陷症家系进行实验室表型诊断和分子基因突变检测，以期寻找致病基因并初步探讨其分子发病机制。
方法：
检测两个家系先症者及其相关家族成员的血浆凝血酶原时间（prothrombintime，PT）、活化部分凝血活酶时间（activatedpartialthromboplastintime，APTT）、纤维蛋白原（fibrinogen，FIB）含量、凝血因子Ⅱ活性（coagulationfactorⅡactivity，FⅡ∶C）、凝血因子Ⅴ活性（coagulationfactorⅤactivity，FⅤ∶C）、凝血因子Ⅶ活性（coagulationfactorⅦactivity，FⅦ∶C）、凝血因子Ⅶ抗原（coagulationfactorⅦantigen，FⅦ∶Ag）含量和凝血因子Ⅹ活性（coagulationfactorⅩactivity，FⅩ∶C）等指标，结合临床表现以明确临床诊断。采用Sanger一代测序法对先症者F7基因9个外显子及其侧翼序列、5’和3’非翻译区进行片段扩增测序，发现突变位点后用反向测序予以证实，并检测家系成员相应的突变位点区域。使用ClustalW软件对氨基酸序列保守性进行分析，同时分别用PolyPhen-2、SIFT和MutationTaster等在线生物信息学软件预测突变位点对蛋白质功能可能存在的潜在影响。利用Swiss-pdbViewer软件分析FⅦ蛋白模型野生型和突变型局部空间构型及分子间作用力的变化。
结果：
家系1：先症者为48岁男性，临床表现为反复鼻出血，表型检测结果显示先证者1的PT为31.2s/13.6s，明显延长；FⅦ∶C和FⅦ∶Ag分别为4％和6％，较正常对照显著降低。先证者母亲、父亲、大姐、二姐和哥哥PT值均稍延长；FⅦ∶C和FⅦ∶Ag均下降至正常对照的一半左右。其二姐夫和外甥女的各项实验室指标及家系成员的其他相关凝血指标均无明显异常。基因检测结果显示先证者F7基因第8外显子存在c.1224T＞G纯合错义突变导致p.His348Gln，其母亲、父亲、大姐、二姐和哥哥均存在c.1224T＞G杂合错义突变。保守性分析显示，His348位点在同源物种间高度保守；PolyPhen-2和SIFT生物信息学软件预测结果显示，该突变位点可大概率地存在对蛋白质结构和功能产生一定的影响；蛋白模型分析显示，该突变位点可导致His348和Thr359以及Gly360之间形成的氢键数目减少，从而通过影响蛋白结构的稳定性从而导致蛋白活性受损。
家系2：先证者为63岁男性，术前检测发现PT为36.1s/13.6s，明显延长，FⅦ∶C为2%，显著降低；FⅦ∶Ag为89%，在正常参考范围；家系中其余8位成员PT均略高于正常对照组，FⅦ∶C均略低于正常对照组；先证者及家系成员的其他相关凝血指标均无明显异常。基因分析显示，先证者F7基因第8外显子存在c.1165T＞G纯合错义突变导致p.Cys329Gly，8位家系相关成员的F7基因相同片段序列分析均显示c.1165T＞G杂合错义突变。保守性分析显示，Cys329位点在同源物种间高度保守；两种生物信息学软件（Polyphen和MutationTaster）都提示该突变可大概率地引起蛋白功能变化，具有致病性；蛋白模型分析显示，突变后Gly329位点与Cys310位点之间二硫键消失，周边静电磁场发生改变。
结论：
先症者1的F7基因存在c.1224T＞G纯合错义突变导致p.His348Gln，该突变位点分别来自其姑表近亲婚配的父母，是导致FⅦ∶C和FⅦ∶Ag显著降低的主要原因；该突变可导致His348与Thr359以及Gly360之间形成的氢键数目减少，从而可能通过影响蛋白结构的稳定性从而导致蛋白活性受损。
先症者2的F7基因存在c.1165T＞G纯合错义突变导致p.Cys329Gly，该突变位点也分别来自其姨表近亲婚配的父母，并与FⅦ∶C降低有关；该突变可导致Gly329位和Cys310位之间的二硫键消失，使周围静电磁场发生改变，从而引起FⅦ∶C降低。
对两个由纯合子突变导致的遗传性凝血因子Ⅶ（coagulationfactorⅦ,FⅦ）缺陷症家系进行实验室表型诊断和分子基因突变检测，以期寻找致病基因并初步探讨其分子发病机制。
方法：
检测两个家系先症者及其相关家族成员的血浆凝血酶原时间（prothrombintime，PT）、活化部分凝血活酶时间（activatedpartialthromboplastintime，APTT）、纤维蛋白原（fibrinogen，FIB）含量、凝血因子Ⅱ活性（coagulationfactorⅡactivity，FⅡ∶C）、凝血因子Ⅴ活性（coagulationfactorⅤactivity，FⅤ∶C）、凝血因子Ⅶ活性（coagulationfactorⅦactivity，FⅦ∶C）、凝血因子Ⅶ抗原（coagulationfactorⅦantigen，FⅦ∶Ag）含量和凝血因子Ⅹ活性（coagulationfactorⅩactivity，FⅩ∶C）等指标，结合临床表现以明确临床诊断。采用Sanger一代测序法对先症者F7基因9个外显子及其侧翼序列、5’和3’非翻译区进行片段扩增测序，发现突变位点后用反向测序予以证实，并检测家系成员相应的突变位点区域。使用ClustalW软件对氨基酸序列保守性进行分析，同时分别用PolyPhen-2、SIFT和MutationTaster等在线生物信息学软件预测突变位点对蛋白质功能可能存在的潜在影响。利用Swiss-pdbViewer软件分析FⅦ蛋白模型野生型和突变型局部空间构型及分子间作用力的变化。
结果：
家系1：先症者为48岁男性，临床表现为反复鼻出血，表型检测结果显示先证者1的PT为31.2s/13.6s，明显延长；FⅦ∶C和FⅦ∶Ag分别为4％和6％，较正常对照显著降低。先证者母亲、父亲、大姐、二姐和哥哥PT值均稍延长；FⅦ∶C和FⅦ∶Ag均下降至正常对照的一半左右。其二姐夫和外甥女的各项实验室指标及家系成员的其他相关凝血指标均无明显异常。基因检测结果显示先证者F7基因第8外显子存在c.1224T＞G纯合错义突变导致p.His348Gln，其母亲、父亲、大姐、二姐和哥哥均存在c.1224T＞G杂合错义突变。保守性分析显示，His348位点在同源物种间高度保守；PolyPhen-2和SIFT生物信息学软件预测结果显示，该突变位点可大概率地存在对蛋白质结构和功能产生一定的影响；蛋白模型分析显示，该突变位点可导致His348和Thr359以及Gly360之间形成的氢键数目减少，从而通过影响蛋白结构的稳定性从而导致蛋白活性受损。
家系2：先证者为63岁男性，术前检测发现PT为36.1s/13.6s，明显延长，FⅦ∶C为2%，显著降低；FⅦ∶Ag为89%，在正常参考范围；家系中其余8位成员PT均略高于正常对照组，FⅦ∶C均略低于正常对照组；先证者及家系成员的其他相关凝血指标均无明显异常。基因分析显示，先证者F7基因第8外显子存在c.1165T＞G纯合错义突变导致p.Cys329Gly，8位家系相关成员的F7基因相同片段序列分析均显示c.1165T＞G杂合错义突变。保守性分析显示，Cys329位点在同源物种间高度保守；两种生物信息学软件（Polyphen和MutationTaster）都提示该突变可大概率地引起蛋白功能变化，具有致病性；蛋白模型分析显示，突变后Gly329位点与Cys310位点之间二硫键消失，周边静电磁场发生改变。
结论：
先症者1的F7基因存在c.1224T＞G纯合错义突变导致p.His348Gln，该突变位点分别来自其姑表近亲婚配的父母，是导致FⅦ∶C和FⅦ∶Ag显著降低的主要原因；该突变可导致His348与Thr359以及Gly360之间形成的氢键数目减少，从而可能通过影响蛋白结构的稳定性从而导致蛋白活性受损。
先症者2的F7基因存在c.1165T＞G纯合错义突变导致p.Cys329Gly，该突变位点也分别来自其姨表近亲婚配的父母，并与FⅦ∶C降低有关；该突变可导致Gly329位和Cys310位之间的二硫键消失，使周围静电磁场发生改变，从而引起FⅦ∶C降低。