19-去甲睾酮(19-nortestosterone，17 β NT)，是一种具有雄激素样作用的同化激素，常常作为促生长剂用于动物源食品的生产中，以提高产量和饲养效率。许多国家和地区都已禁止利用17 β NT来促进动物的生长。本研究制备了抗17 β NT的多克隆抗体，建立了17 βNT的酶联免疫检测(ELISA)方法，并在此基础上开发了17 β NT的ELISA试剂盒。 将19-去甲睾酮经羧甲基羟胺肟化，然后采用混合酸酐法将肟化产物分别与牛血清蛋白(bovine serum albumin，BSA)和卵清白蛋白(ovalbumin，OVA)偶联，紫外分光光度法测定其交联率分别为22和19。用17 β NT与BSA的偶联物进行动物体免疫，获得了17 βNT的多克隆抗体。经间接酶联免疫测定，其抗血清的稀释度可以达到1：102400。 以此抗血清为基础，建立了17 β NT的间接酶联免疫方法。考察了反应时间、离子强度、洗液的浓度以及抗体稀释液的pH等因素对该方法的影响，选择最优的分析条件。优化后标准曲线的线性回归方程为y=-0.3194x+1.6316，R<2>=0.9927，其线性范围为0.1～25 ng/mL；IC<,50>为3.5ng/mL。该方法对六种结构类似的甾类化合物进行检查，均无明显的交叉反应。采用1.0ng/g和5.0ng/g两个添加浓度水平分别测定17 β NT在空白牛肌肉组织的回收率，其中1.0ng/g的回收率范围为96.4％～104.7％，变异系数范围为5.2～8.3％，5.0ng/g的回收率范围为76.9％～79.3％，变异系数范围为3.1～5.6％。 将自制试剂盒与荷兰EURO-DIAGNOSTICA公司的试剂盒进行各方面的比较，自制试剂盒在回收率、变异系数等参数方面与ED公司的试剂盒基本一致。最后，通过LC/MS/MS方法确证，自制试剂盒的检测结果具有很高的准确率。本论文研制的ELISA试剂盒的各项参数都达到了国外试剂盒的指标和要求，可用于实际检测。