【摘 要】
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目的:1、实现保加利亚乳杆菌β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌的克隆,为建立和完善β-半乳糖苷酶基因数据库提供资料.2、为探索微生态学与基因工程相结合来解决乳糖吸收不良这一
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目的:1、实现保加利亚乳杆菌β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌的克隆,为建立和完善β-半乳糖苷酶基因数据库提供资料.2、为探索微生态学与基因工程相结合来解决乳糖吸收不良这一新途径提供直接、充分的实验研究资料.方法:1、采用MRS培养基,在烛缸CO<,2>条件下从酸奶中分离得到保加利亚乳杆菌,依据伯杰氏细菌鉴定手册(第八版)对细菌进行染色和生化鉴定.2、以保加利亚乳杆菌基因组为模板,依据文献设计引物,进行PCR扩增.分析产物长度及酶切图谱与文献相比较进行鉴定.3、用DNA ligation kit Ver 2 将目的基因与载体连接转化大肠杆菌JM109.从耐药性、重组质粒大小和质粒酶切图谱这几个方面筛选阳性转化子.结论:1、采用MRS培养基在CO<,2>条件下可有效的分离酸奶中保加利亚乳杆菌,此法试剂便宜,不需特殊仪器,分离得率高(66.67﹪),培养方法简单(烛缸法),适于在基层推广.2、采用该试验优化的PCR条件,在我们设计的特异性引物的引导下,可完整地扩增出保加利亚乳杆菌β-半乳糖苷酶基因,为基因研究提供了极大的便利.3、该实验最终筛选得到两株阳性转化子,证实了乳酸菌基因在大肠杆菌中克隆的可行性,可为进一步分析基因,建立和完善乳酸菌及β-半乳糖苷酶基因数据库提供保证,也为探索微生态学与基因工程相结合来解决乳糖吸收不良的新途径打下了一定的基础.
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