甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)是引发禽流感的主要病原,隶属于正黏病毒科,为8节段的负链RNA病毒。病毒的核糖核酸蛋白(virus Ribonucleoprotein,vRNPs)为病毒基因组转录复制的基本单位。在侵染早期,vRNPs需要进入细胞核参与病毒基因的复制及转录。新合成的病毒蛋白在细胞核中组装,并通过病毒NEP蛋白(nuclear export protein,NEP),M1蛋白及宿主蛋白输出蛋白1(chromosomal maintenance 1,CRM1)与vRNPs组成出核复合物,将子代的vRNPs运送出核。NS节段为甲型流感病毒基因组中最小的RNA节段。由NS节段通读表达的NS1蛋白为病毒的非结构蛋白,但在病毒感染细胞中的表达水平却非常高。NS1为病毒的多功能蛋白,参与抵抗宿主免疫反应,宿主与病毒的RNA剪接及转录调控及宿主和病毒蛋白的翻译调控等过程。本研究观察到NS1蛋白对相同节段编码的NEP mRNA的转录及剪接都有增强作用,深入研究发现NS1蛋白RNA结合结构域为影响NS节段的转录的关键结构域而效应结构域为影响NS节段剪接的关键结构域。继而通过绿色荧光蛋白融合蛋白及免疫荧光的方法观察到NS1蛋白会对NEP蛋白亚细胞定位造成影响:NS1蛋白不存在时NEP蛋白主要定位于细胞核,NS1蛋白存在时,NEP蛋白出核趋势明显。但无论NS1蛋白是否存在,NEP蛋白都能与宿主蛋白CRM1互作。NEP蛋白出核对于病毒的生理意义是帮助vRNPs出核,因此我们使用反向遗传学的方法构建出NS1截短的重组病毒,免疫荧光观察NS1突变病毒及野生型病毒vRNPs的出核情况,结果显示,野生型的PR8病毒侵染细胞4小时后,NP蛋白细胞质定位细胞占总数的96%,且8小时后NP蛋白基本完成第二次入核。NS1蛋白38位氨基酸终止突变后,病毒侵染4小时后,NP蛋白出核率为0.5%,且11小时后,NP蛋白出核率仅为28%。NS1蛋白80位氨基酸终止突变,病毒侵染后4小时后,NP蛋白出核率为30%,NS1蛋白功能缺失病毒的vRNPs出核明显受阻。同时我们测定了NS1截短病毒及野生型病毒的病毒滴度。野生型的病毒滴度与完全缺失NS1病毒滴度的差距约为10000倍,而保留RNA结合结构域的NS1病毒与野生型病毒滴度的差距为10倍。这说明,NS1蛋白功能完全缺失,病毒几乎不能进行复制,而保留NS1蛋白的RNA结合结构域,病毒颗粒的复制能力比野生型略有降低,因此NS1蛋白RNA结合结构域对于病毒颗粒的复制影响显著。综上所述,甲型流感病毒NS1蛋白作为一种病毒多功能蛋白,我们的研究发现,除了参与病毒抵抗宿主干扰素应答,还通过影响NS节段mRNA的剪接及转录,进而调节病毒核糖核蛋白复合物的出核,参与病毒的生活史。