乙肝病毒X基因变异对AR在乙肝致癌过程中作用的影响

来源 :第二军医大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yunguii
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
研究目的构建稳定表达人AR的Hep G2细胞系,分别转染空质粒、HBx野生型质粒和变异型质粒至Hep G2细胞,通过检测细胞的迁移力、增殖周期和细胞凋亡等,探究HCC相关HBx变异与AR的交互作用对肝癌恶性程度的影响。研究方法1.构建携带人AR外显子基因、绿色荧光蛋白基因(GFP)及嘌呤霉素基因(PM)的重组表达质粒(p CDH-CMV-MCS-EF1-GFP-Puro);2.重组表达质粒包装感染Hep G2细胞及嘌呤霉素加压筛选,构建能稳定表达人AR的Hep G2细胞系;3.分别以慢病毒空载体、携带HBx野生型全长基因的慢病毒载体以及携带A1727G+A1762T/G1764组合突变或3’端缺失突变的HBx基因的慢病毒载体,瞬时转染Hep G2-GFP-AR细胞,通过细胞迁移实验和流式细胞技术检测细胞周期和细胞凋亡,观察不同HBx与AR在乙肝相关性肝癌发生发展中的作用。结果1.成功构建了携带人AR基因的慢病毒表达载体p CDH-CMV-MCSEF1-GFP-Puro-AR。2.通过携带AR基因的慢病毒感染Hep G2细胞,筛选出稳定高表达人AR的Hep G2细胞株,经流式细胞术验证其GFP的表达量,传至第10代后,该细胞株GFP的表达量为97.7%;Western-blot实验鉴定单克隆细胞株传至第14代时AR的表达量,2号克隆AR的表达量较高。3.选取AR表达量较高的2号克隆用于后续功能实验,Transwell实验结果显示:HBx空转染组在加入DHT后,下室中细胞OD值(0.45±0.02)显著高于未加DHT组(0.33±0.03),p<0.001;与未转染HBx基因的Hep G2-GFP-AR细胞(空-组)(0.33±0.03)比较,转染携带HBx A1727G+A1762T/G1764组合突变(167-组)(0.43±0.01,p=0.001)或3’端缺失突变(CT-组)(0.45±0.03,p<0.001)的质粒后,下室中细胞OD值显著增高;Hep G2-GFP-AR细胞在分别转染HBx A1727G+A1762T/G1764组合突变(167-组)或3’端缺失突变(CT-组)的质粒后,加入DHT时,下室中细胞OD值显著降低(167-组vs 167+组,0.43±0.01 vs 0.36±0.02,p=0.009;CT-组vs CT+组,0.45±0.03 vs 0.35±0.04,p=0.001)。细胞周期实验结果显示:各组间G2+S期细胞总占比无显著统计学差异。细胞凋亡实验结果显示:各组间细胞总凋亡率无显著统计学差异。结论1.本实验成功构建了携带人AR外显子基因的慢病毒表达载体p CDH-CMVMCS-EF1-GFP-Puro-AR;并利用该载体,慢病毒感染Hep G2细胞,成功构建了稳定表达AR的Hep G2细胞系Hep G2-GFP-AR。2.通过AR高表达细胞系Hep G2-GFP-AR进一步功能实验,发现在高表达AR的Hep G2-GFP-AR细胞中,转染空载体组加入DHT后细胞迁移能力显著增强,而转染HBx组合突变或3’端缺失突变的HBx后亦能够增强细胞的迁移能力;但加入DHT后则对HBx A1727G+A1762T/G1764组合突变或3’端缺失突变提高肿瘤细胞迁移能力的效应可能具有抑制作用;本研究未发现HBx相关突变株以及AR对Hep G2细胞的增殖和凋亡有显著影响。
其他文献
南京大胜关桥的国铁和地铁接触网同桥面近距离水平敷设,这在国内尚属首次,并且无经验可参考。必需考虑交、直流带电线路间的电磁感应对运营、维护等带来的影响。结合国铁交流
本文主要介绍一款基于单片机的空气质量报警器的设计。本设计以单片机为核心,运用C语言来进行单片机程序的编写来达到对粉尘传感器、LCD液晶显示屏等模块的控制,最终完成了对
目的:探究硫酸沙丁胺醇治疗急性轻中度支气管哮喘患儿的临床疗效。方法:随机选取2015年10月~2016年10月我院收治的60例急性轻中度支气管哮喘患儿为研究对象,按照治疗方式的不
通过MEF2A基因PCR的实验过程,研究游离性Mg2+在不同浓度情况下对Taq酶活性及MgCl2 作为一种盐对PCR效果的影响. 使PCR反应体系其它成分浓度固定,配制含不同Mg2+浓度的缓冲液
目的:观察长期接受核苷(酸)类似物(NAs)治疗获得病毒学应答,且HBsAg低水平的HBeAg阴性CHB患者序贯α干扰素(IFNα)治疗的疗效,并探讨HBs Ag消失的相关因素。方法:长期接受NAs
在社会不断发展背景下,机械制造业的发展逐步扩大,而机械加工设备是机械制造业至关重要的设备之一。在一定程度上,机械加工设备与机械产品的质量以及机械制造经济间具有密不
潘知常先生在20世纪80、90年代打出“生命美学”这个旗号是具有积极意义的,它使当代美学研究转向人的生命关注的“现代视野”上来。但是,潘知常先生对“生命美学”的论证是存
目的评估利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)在HIV感染患者中诊断结核病的临床价值。方法检索Pub Med、西文生物医学期刊文献数据库(Free Medical Journ
水源热泵可分为地源热泵和水环热泵。地源热泵包括地下水热泵、地表水(江、河、湖、海)热泵、土壤源热泵:利用自来水的水源热泵习惯上被称为水环热泵。
高层建筑的不断发展,建筑工程在技术应用及结构设计上趋于多样化。高层建筑在体型构造和平面布置上也愈来愈复杂,这对于现代高层建筑设计及结构分析而言是一种挑战,而设计钢