目的:糖尿病是由于胰岛素分泌缺陷或其生物作用受损,或两者兼有引起的一组以高血糖为特征的代谢性疾病。通过之前的研究发现小肠能够分泌胰岛素,在糖尿病发病过程中起到一定的作用。为进一步研究大鼠小肠中的胰岛素是否为小肠上皮细胞分泌,我们通过本次研究提取大鼠小肠上皮细胞进行细胞体外培养,测定大鼠小肠上皮细胞胰岛素基因表达水平,从蛋白水平测定大鼠小肠上皮细胞是否分泌了胰岛素原,以及胰岛素原和C肽的水平。确定大鼠小肠上皮细胞胰岛素分泌的功能。方法:本实验通过脱颈处死Wistar孕鼠,剖宫取出胎鼠小肠,将胎鼠小肠上皮细胞以及胰岛细胞进行原代培养,用胰岛细胞作为对照,将两种细胞置于葡萄糖浓度分别为100mg/d L,200mg/d L,300mg/d L,400mg/d L的培养基中传代培养。经过传代培养后,分别取各细胞总RNA,反转录成c DNA,普通PCR检测出大鼠小肠上皮细胞胰岛素m RNA的存在,然后用实时荧光定量PCR检测大鼠小肠上皮细胞和胰岛细胞胰岛素m RNA的相对表达量,用统计学方法,相同浓度下两种细胞的胰岛素m RNA表达量作比较。用免疫组化的方法检测细胞中的胰岛素以及胰岛素原的表达情况。用蛋白层析分离蛋白,Western Blot鉴定胰岛素原的活性。结果:经过普通PCR检测出大鼠小肠上皮细胞确实有胰岛素基因的表达。实时荧光定量PCR数据显示大鼠小肠上皮细胞在正常情况下胰岛素m RNA表达量远低于大鼠胰岛细胞,葡糖糖浓度较高的情况下胰岛素m RNA表达水平有一定的提高,在葡萄糖浓度为200mg/d L的时候达到最高,接近大鼠胰岛细胞的表达水平。经过测定,可以确定大鼠小肠上皮细胞能够分泌胰岛素原,但是却没有胰岛素和C肽的生成。结论:本实验证明了大鼠小肠细胞能表达出胰岛素基因,并且在葡萄糖浓度为200mg/d L的时候大鼠小肠上皮细胞和胰岛细胞的胰岛素m RNA相对表达量没有显著差异(P>0.05)。说明小肠上皮细胞具有一定的分泌胰岛素原的功能,并且跟葡萄糖浓度有密切的关系,可能与糖尿病的发病机制有关。