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甜菜单体附加系M14(2n=18+1)是含有野生白花甜菜染色体的品系,其具有有性生殖兼无性生殖的特性。本实验室前期利用蛋白质双向电泳,初步识别了甜菜单体附加系M14和栽培甜菜花后一小时花器官的蛋白质组。本文选取两个甜菜单体附加系M14花后一小时的差异蛋白质点(编号为M14Flh-1和M14Flh-2),对其进行纯化处理,并开展了质谱检测。结果显示M14Flh-1含有175个氨基酸,并且首位氨基酸为“M”,其蛋白分值与置信水平符合数据取舍要求,结果理想。M14F1h-2含有231个氨基酸,但首位氨基酸不是“M”,其蛋白分值与置信水平符合数据取舍要求较少,结果不甚理想。对所得氨基酸序列分析发现M14F1h-1的氨基酸序列与核酮糖1,5-二磷酸羧化酶(Ribulose 1,5-bisphosphate carboxylase)或其小亚基(主要是水稻的核酮糖1,5-二磷酸羧化酶或其小亚基)具有极高的相似性和同源性。依据质谱检测所得的氨基酸序列设计简并引物(24条M14F1h-1的引物,36条M14F1h-2的引物),利用RACE技术进行3’端的扩增,对扩增结果进行纯化回收、克隆并测序,结果显示只有编号为M14F1h-1-12的引物得到的扩增结果其3’序列经翻译后与质谱检测结果吻合。M14F1h-2的36条引物中,M14F1h-2-3系列引物得到的扩增结果,其条带过多且有些呈现弥散状态,故将该系列引物舍弃。根据M14F1h-1-12号引物所得的3’序列设计5’RACE引物(共六条),利用SMART RACE技术进行5’端的扩增,对扩增结果进行纯化回收、克隆并测序,进而得到其5’端序列。通过对所得到的3’端序列和5’端序列进行分析和比对,从而得到了表达M14Flh-1蛋白点的cDNA全长(m14f1h-1-12,854bp)。利用cDNA全长设计引物(正、反向引物共三对)进行全长验证,得到预期结果,对cDNA全长进行分析,发现其翻译后所得氨基酸序列与质谱检测结果一致。将此cDNA序列在NCBI数据库里进行分析,结果显示该序列与核酮糖1,5-二磷酸羧化酶或其小亚基(主要是水稻的核酮糖1,5-二磷酸羧化酶或其小亚基)有极高的相似性和同源性。本文工作为进一步解释甜菜单体附加系M14后代染色体数目的变化,提供了蛋白质表达差异的实验依据。