【摘 要】
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目的结直肠癌（colorectal cancer,CRC）作为一种恶性肿瘤具有较高的发病率,而且近年来结直肠癌在国内的发病率呈现上升趋势。结直肠癌的治疗方式主要以手术为主,化疗与靶向治疗为辅,目前针对结直肠癌的治疗方法在不断进步,对于中晚期患者,除了手术同时也需要药物来改善疗效。随着基因靶向治疗研究的不断进步,越来越多的靶向治疗药物被研发并投入使用,老药新用也成为基因靶向治疗中一个重要的研究主题。
【基金项目】
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项目名称:阿司匹林对Ⅲ期结直肠癌患者的疗效及其与PIK3CA基因表达的关系研究,项目合同编号:2015GXNSFAA139185,项目来源:广西自然科学基金项目,项目起止时间:2015年9月至2018年8月
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目的结直肠癌（colorectal cancer,CRC）作为一种恶性肿瘤具有较高的发病率,而且近年来结直肠癌在国内的发病率呈现上升趋势。结直肠癌的治疗方式主要以手术为主,化疗与靶向治疗为辅,目前针对结直肠癌的治疗方法在不断进步,对于中晚期患者,除了手术同时也需要药物来改善疗效。随着基因靶向治疗研究的不断进步,越来越多的靶向治疗药物被研发并投入使用,老药新用也成为基因靶向治疗中一个重要的研究主题。阿司匹林作为一种非甾体抗炎药,具有解热镇痛以及抗炎的效果,近年来的研究表明阿司匹林可以提高结直肠癌患者的生存率,而阿司匹林对PIK3CA突变型结直肠癌患者具有更好的治疗效果。阿司匹林治疗结直肠癌的具体通路与机制尚不明确,本研究的目的在检测阿司匹林在PIK3CA突变的结直肠癌患者中的治疗通路与机制。方法使用免疫组织化学法检测PIK3CA基因突变CRC患者和PIK3CA野生型患者的正常组织与癌组织中PI3K和Raptor的表达水平,对正常组织与癌组织中的表达进行比较,判断PI3K与Raptor在结直肠肿瘤发生发展与治疗中的作用;将PIK3CA突变CRC患者癌组织与PIK3CA野生型CRC患者癌组织中的表达进行比较,判断PI3K/Raptor与PIK3CA突变的结直肠癌之间的关系。为了证明阿司匹林通过PIK3/Akt/Raptor通路对PIK3CA突变的CRC患者具有更好的治疗效果,使用阿司匹林处理PIK3CA突变的CRC细胞（HCT-116和RKO）,使用不同浓度阿司匹林处理人结肠癌细胞HCT116与RKO后采用Western-bolt法检测HCT116与RKO细胞中PI3K/Akt/Raptor通路相关蛋白的变化情况,同时检测其下游影响细胞增殖的关键蛋白4E-BP1与S6K1的变化情况。采用CCK8法、JC-1法观察线粒体膜电位以及流式细胞凋亡检测法检测使用阿司匹林后突变细胞凋亡的变化,并且使用Western-bolt法来验证使用阿司匹林后突变细胞中凋亡蛋白Bax、Bcl2、Caspase3的变化情况。采用Q-PCR法与Western-bolt法观察不使用阿司匹林与使用阿司匹林后突变细胞中自噬蛋白LC3、Beclin1的表达,同时检测细胞的自噬流变化来观察细胞的自噬情况。结果免疫组化的结果显示癌组织中PI3K与Raptor的表达高于正常组织,且在PIK3CA突变患者组织中的表达高于PIK3CA野生型患者,这一结果提示PI3K/Akt/Raptor通路在PIK3CA突变的CRC的肿瘤发展过程中有着重要意义。Western-bolt表明使用阿司匹林后PIK3CA突变的CRC细胞中PI3K/Akt/Raptor信号通路受到了抑制;且其下游增殖蛋白4E-BP1以及S6K1的磷酸化受到抑制说明PIK3CA突变细胞的增殖受到抑制。CCK8检测法、线粒体跨膜电位检测法与流式细胞检测法结果显示使用阿司匹林后PIK3CA突变细胞的凋亡出现了明显升高,且细胞凋亡率随着药物浓度的升高而升高;而相关蛋白Bax/Bcl2的表达以及Caspase 3的表达升高说明PIK3CA突变的CRC细胞的凋亡被激活。使用阿司匹林后突变细胞中自噬相关蛋白beclin1、LC3表达升高,同时突变细胞中自噬流被激活,说明阿司匹林可激活PIK3CA细胞的自噬。结论阿司匹林可通过PI3K/Akt/Raptor信号通路调节PIK3CA突变的CRC细胞的增殖,凋亡和自噬,从而起到杀伤抑制PIK3CA突变型CRC细胞的功能。
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