口腔扁平苔藓患者白色念珠菌检出率及分离株SAP表达的研究

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目的:   扁平苔藓(lichen planus,LP)是一种慢性炎性皮肤黏膜病,常常伴发口腔病变(口腔扁平苔藓,oral lichen planus,OLP),成人中OLP的发病率约为1-2%,是仅次于复发性阿弗他溃疡的常见口腔粘膜病。据报道,OLP约有0-2%的恶变率,被认为是一种癌前状态。但其发病机制尚不明确,多种危险因素与其相关。有学者证明免疫功能障碍、精神疾病、遗传易感性、系统性疾病及HCV、EB病毒、HPV感染及真菌感染等因素在OLP的发病中有重要作用。   人类口腔真菌感染最常见的是白色念珠菌(Candida albicans,CA)感染。口腔扁平苔藓与口腔念珠菌病在临床表现上有相似性, CA从OLP患者口腔及病损局部的检出率较高,抗真菌治疗对部分患者有效,由此国内外学者开始关注该菌在OLP发病、进展及预后中的作用。细胞外水解酶的产生被认为是白色念珠菌的一种重要的毒理因素,这其中分泌型天冬氨酸蛋白酶(secreted asparty(1) proteinase,Saps)的研究最为广泛。国内外学者深入探究了不同白色念珠菌株体内及体外实验条件下Saps分泌和SAP基因表达情况,对于从不同临床类型OLP患者口腔中分离的白色念珠菌SAP基因表达模式及其与OLP疾病状态之间的关系国内外鲜有报道。   本实验通过对白色念珠菌健康携带者、充血糜烂型OLP患者及普通型OLP患者CA携带率进行的流行病学调查及对各组CA临床分离株与KB细胞共同培养下SAP基因表达情况所进行的对比来进一步揭示白色念珠菌Saps与口腔扁平苔藓之间的关系。   方法:   收集100例健康对照组患者、50例充血糜烂型OLP患者及100例普通型OLP患者的含漱液,经分离培养及真菌学鉴定获得白色念珠菌临床分离株。随机抽取每组各15株白色念珠菌进行与KB细胞的共培养,之后在共培养的1、3、6、12、24小时抽取培养物的总RNA,采用RT-PCR反应对SAP1-10进行mRNA水平的检测。对各组共培养形态学结果及SAP基因表达结果进行汇总分析。   结果:   1、随着白色念珠菌与KB细胞共培养时间的延长,白色念珠菌由孢子型逐渐变为菌丝型并互相纠缠;KB细胞逐渐趋于死亡状态。   2、在与KB细胞共培养的3小时及6小时,普通型OLP组及充血糜烂型OLP组的白色念珠菌SAP1、SAP3基因表达阳性例数均大于健康对照组;充血糜烂型OLP组的白色念珠菌SAP5基因表达阳性例数大于健康对照组及普通型OLP组。   3、其余同一时间点的三组数据间差异无统计学意义。   结论:   1、充血糜烂型OLP患者组的白色念珠菌检出率高于健康对照组及普通型OLP患者组。   2、SAP1-10基因在健康对照组、充血糜烂型OLP患者组及普通型OLP患者组分离的白色念珠菌与KB细胞共培养时都可能出现表达。   3、在白色念珠菌与OLP的致病关联中,Sap1、3、5可能是10个家族成员中毒力作用较突出者。
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