植物过敏素Harpin为一种植物病原菌产生的蛋白质，能够在非寄主植物上诱导过敏反应，从而提高植物自身的系统抗病性，抵抗病原物引起的病害，所以可以作为一种重要的植物病害绿色防治农药。本文研究了胡萝卜软腐欧氏菌(Erwiniacarotovora)中的Harpin，构建基因工程生防菌，防治植物病害。首先克隆出胡萝卜软腐欧氏杆菌胡萝卜亚种Erwinia carotovora subsp．carotovora的菌株SE9中编码HarpinEcc9的基因hrpNEcc9，测序后利用相关生物学软件分别预测了HarpinEcc9的分子量和二级结构。结果显示：HarpinEcc9中不含半胱氨酸；疏水氨基酸和亲水氨基酸分布均匀；存在大量的无规则卷曲区域。因此，推测它具有一个简单并且柔韧性很强的开放式结构。同时，将HarpinEcc9与其他Harpin蛋白的核苷酸和氨基酸序列进行同源性比对，得出序列间差异，为以后研究Harpin的结构和功能关系奠定了基础。其次，将基因hrpNEcc9克隆到Ⅱ型分泌机制的诱导表达载体pExSecⅠ的金黄色葡萄球菌蛋白A信号肽及ZZ片段后，得到重组质粒pES-hrpN，转化至大肠杆菌BL21(DE3)，获得重组菌BL21(DE3)(pES-hrpN)。Harpin的N端连接ZZ序列后，形成ZZ-Harpin融合蛋白，在BL21(DE3)中，通过IPTG诱导表达，信号肽引导，以Ⅱ型分泌机制分泌到胞外。过敏反应检测说明：ZZ序列不会影响Harpin蛋白的活性；融合蛋白对蛋白酶K敏感，对热不敏感，这与Harpin蛋白的特性是一致的。为了避免Harpin蛋白诱导表达对于生防工程菌田间应用的限制，从而持续诱导植物抗性，大大提高防病、抗病效果，本文尝试构建不需要诱导的组成型表达Harpin的重组菌。将pES-hrpN中的基因SZZ-hrpNEcc9，克隆到酶切后的组成型表达载体pCPP2139中，得到重组质粒pCS-hrpN，转化至大肠杆菌Ecoli DH5a，获得重组菌DH5a(pCS-hrpN)。通过研究发现重组菌可以在不需要诱导的情况下表达融合蛋白ZZ-Harpin。由于重组菌表达的融合蛋白ZZ-Harpin以包涵体形式存在于细胞内，上清CFEP和胞外均无目的蛋白，无法诱导植物过敏反应，所以将进一步研究构建合适的组成型表达Harpin的重组菌。