论文部分内容阅读
研究背景和目的肝细胞癌（以下简述肝癌）是世界第五大常见肿瘤，在癌症相关死因中排名第三。尽管索拉菲尼，一种多靶点、多激酶抑制剂被用来治疗晚期肝癌，但其治疗缓解率仍然较低。组蛋白去乙酰酶（histone deacetylases (HDAC)）家族参与基因的表观学调控，在肿瘤进展和化疗耐受中发挥重要作用。因此，组蛋白去乙酰酶抑制剂(HDACIs)具有潜在的抗肿瘤效果。但是，组蛋白去乙酰酶抑制剂是否能增强索拉菲尼的抗肝癌效果仍不清楚。本研究拟运用分子生物学和细胞生物学的实验方法研究组蛋白去乙酰酶抑制剂联用索拉菲尼对肝癌的抑制效果及机制。实验方法：1.用结晶紫染色法检测Vorinostat和Sorafenib单独或联合使用对肝癌细胞系增殖的抑制作用；2.用PI染色法检测Vorinostat和Sorafenib单独或联合使用对肝癌细胞系细胞周期的影响;3.用AnnexinV染色法、活性Caspase3水平法检测Vorinostat和Sorafenib单独或联合使用对肝癌细胞系凋亡的影响；4.用Western blot法检测Vorinostat和Sorafenib单独或联合使用对肝癌细胞系周期、凋亡相关蛋白、自噬相关蛋白表达水平的影响；5.用siRNA转染法干扰Beclin1表达或使用3MA抑制细胞自噬；6.用Western blot法检测Vorinostat和Sorafenib单独或联合使用对肝癌细胞系P53的乙酰化的影响。结果:1. Vorinostat可发挥协同作用，增强Sorafenib的抑制肝癌增殖的效果；2. Vorinostat和sorafenib联合使用进一步使肝癌细胞阻滞于G0/G1期；3. Vorinostat和sorafenib联合使用进一步促进肝癌细胞发生凋亡；4. Vorinostat和sorafenib联合使用后，肝癌细胞系抗凋亡分子BLC‐2的表达明显下降，促凋亡分子Bax表达增多；5.联合使用Vorinostat和sorafenib产生了Beclin1依赖性的保护性自噬；6.干扰Beclin‐1表达后， P53的乙酰化水平显著增加；7.干扰Beclin‐1可增强vorinostat和sorafenib联用的协同抑制肝癌效果；8.自噬抑制剂3‐MA可增强vorinostat和sorafenib联用的协同抑制肝癌效果。结论：本研究发现，组蛋白去乙酰酶抑制剂vorinostat联用索拉菲尼能增加对肝癌细胞的抑制作用，抑制自噬可进一步增强联用的抗肝癌效果。Vorinostat在肝癌的辅助治疗中具有潜在的应用价值。