论文部分内容阅读
目的:利用体外培养的人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP细胞,探讨大蒜素(DT)单用或与顺铂(DDP)联用对SKOV-3/DDP细胞的增殖抑制及诱导其细胞凋亡的分子机制,为临床上耐顺铂卵巢癌的治疗提供实验依据。方法:体外培养的SKOV-3/DDP细胞,实验随机分为①正常对照组;②大蒜素作用组(终浓度分别为5、10、20、40μg/ml);③顺铂作用组(终浓度分别为5、10、20、40μg/ml);④大蒜素联合顺铂组(于培养基中加入终浓度20μg/ml大蒜素和终浓度5μg/ml顺铂)。MTT法检测SKOV-3/DDP细胞的生长抑制作用;分别采用普通光学显微镜、Giemsa染色和荧光显微镜观察SKOV-3/DDP细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率,分光光度法测Caspase-3活性变化;RT-PCR和Western blot分别检测凋亡相关基因PUMA、Bax、Bcl-2和Bcl-xl的mRNA及蛋白的表达变化。结果:1、大蒜素和顺铂分别对SKOV-3/DDP细胞增殖有一定的抑制作用,且呈明显的浓度-时间依赖性。不同浓度的大蒜素和顺铂分别作用后光密度值与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。但相同时间相同剂量下大蒜素组对SKOV-3/DDP细胞的光密度值明显低于顺铂组(P<0.05或P<0.01),说明大蒜素对SKOV-3/DDP细胞抑制作用优于顺铂。2、大蒜素联合顺铂应用对SKOV-3/DDP细胞抑制率明显高于各自单独用药(P<0.01)。大蒜素和顺铂联合用药具有协同效应。3、大蒜素组和大蒜素联合顺铂处理组中可观察到细胞凋亡所特有的典型形态学特征4、大蒜素能诱导SKOV-3/DDP细胞凋亡,显著提高细胞凋亡率,其中40μg/ml大蒜素48h作用细胞早期凋亡率(25.7±4.41)%显著高于正常对照组(4.5±1.12)%(P<0.01);大蒜素联合顺铂处理组诱导SKOV-3/DDP细胞的早期凋亡的作用优于两者单纯用药(P<0.05或P<0.01),具有协同作用。5、大蒜素能提高Caspase-3活性,40μg/ml大蒜素48h作用SKOV-3/DDP细胞的Caspase-3活性为正常对照组的(2.78±0.16)倍(P<0.01)。大蒜素联合顺铂处理组Caspase-3活性较两药单独用药组明显增高(P<0.01)。6、RT-PCR及Western Blot结果均显示大蒜素组及联合用药组能使凋亡相关基因PUMA和Bax的mRNA和蛋白表达上调(P<0.01),而Bcl-2和Bcl-xl的mRNA和蛋白表达下调(P<0.01)。大蒜素联合顺铂组PUMA和Bax的mRNA和蛋白较单纯用药组明显升高(P<0.01),而Bcl-2和Bcl-xl的mRNA和蛋白较两者单纯用药组明显降低(P<0.01)。结论:1、大蒜素能有效抑制人上皮性卵巢癌耐顺铂SKOV-3/DDP细胞增殖,并能增强SKOV-3/DDP细胞对顺铂的敏感性。2、大蒜素诱导SKOV-3/DDP细胞凋亡,其促凋亡作用可能与调控PUMA、Bax、Bcl-2、Bcl-xl的表达和增强Caspase-3活性相关。3、大蒜素联合小剂量顺铂诱导SKOV-3/DDP细胞凋亡的作用优于两者单独用药,具有协同作用,可减少顺铂的用药量,从而降低顺铂的毒副作用,提高疗效。