氧化葡萄糖酸杆菌催化仲醇拆分及其相关酶的研究

来源 :华东理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nymphamor
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
氧化葡萄糖酸杆菌因其不完全氧化糖、醇生成醛、酮、酸的能力,成为生物工业上应用广泛的微生物之一。以往所报道的氧化葡萄糖酸杆菌催化的底物基本属于多羟基的糖醇和伯醇,而作用于这些底物的膜结合脱氢酶也一直是研究的热点。基因组信息显示氧化葡萄糖酸杆菌含有众多的醛酮还原酶、短链醇脱氢酶、锌结合的脱氢酶等家族的氧化还原酶,但其中是否包含具有仲醇氧化活性的酶并不清楚,而利用氧化葡萄糖酸杆菌催化的动力学拆分反应合成手性仲醇的研究至今未见报道。   本论文首次通过实验证明了氧化葡萄糖酸杆菌静息细胞可催化仲醇的动力学拆分获得单一构型的仲醇。通过调节反应体系中的关键参数——pH值,分别获得了不同构型的仲醇。实验选择了1-苯乙醇,1-苯基-2-丙醇和4-苯基-2-丁醇等三个模式底物,在酸性条件(pH5)下,静息细胞对于R构型仲醇的选择性要大于S构型,反应结束时主要残留S构型仲醇;碱性条件(pH8)下,底物的选择性相反,最终保留R构型的仲醇。通过条件优化,1-苯乙醇,1-苯基-2-丙醇,4-苯基-2-丁醇的e.e值分别可以达到90%(S),100%(S),100%(R)。   在明确氧化葡萄糖酸杆菌静息细胞具有仲醇的选择性氧化特性的基础上,对其中催化该反应的酶进行了初步的鉴定。依据序列等信息,选取了两个可能属于短链醇脱氢酶家族、而功能未知的酶gox2036和gox0525作为研究对象,在E.coli BL21(DE3)中实现了可溶性表达,通过对重组蛋白的底物特异性测定,明确了Gox2036可以选择性地氧化消旋底物中的S构型的仲醇,保留R构型仲醇,为氧化葡糖酸杆菌在碱性条件下负责仲醇催化的主要酶。Gox0525不具备醇氧化活性,与氧化葡糖酸杆菌催化仲醇的反应无关,但它对α-酮羰基化合物、2-酮和酮酯具有较好的还原活性。除了对仲醇的氧化特性外,Gox2036还对脂肪酮、芳香酮、2,3-二酮、羟基酮和酮酯等化合物表现良好的还原特性,尤其是还原α-二酮生成重要的药物前体——手性的羟基酮。
其他文献
纳米材料的概念自诞生开始,因其独特的性质和应用前景,引起了人们的广泛关注。本文首先概述了纳米材料的基本特性、制备方法及其表征手段。目前,纳米材料还主要处于“探索阶段”,本文关注了小尺寸新材料(纳米和微米)的合成与性能测试,以及它们的潜在应用,本文运用新的方法合成出新的纳米材料并考察了它们的相关应用。本文通过硫醇基对介孔二氧化硅功能化,可合成出一种将高分散纳米金颗粒引进介孔二氧化硅孔壁(GMS)的纳
水是人类生活和工农业生产不可或缺的自然资源,随着人口的持续增长和工农业生产的发展,水污染问题日益突出。TiO2因其具有强的氧化还原能力、高化学稳定性及环保无毒的特性,在环
会议
会议
会议
随着人们对环境保护意识的日渐加强,我国对空气质量指标的限制越来越严,对汽车的尾气排放指标要求随之越来越高。为了达到柴油低硫的要求提高柴油机排气质量,近年来国内外石
会议
Aplastic anemia (AA) is more common in Asia than Europe and the USA.The annual incidence is 4/million inThailand,twice higher than that in Europe and Israel.The
会议
会议
The main goals of the treatment of patients with aplastic anemia (AA) are a) Support the patient during acute complications of the disease such as anemia,thromb
会议