核桃源蛋白ACE抑制肽制备及分离纯化的研究

来源 :贵州大学 | 被引量 : 9次 | 上传用户:peterstone138
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核桃蛋白经蛋白酶水解后可获得小分子的多肽,其食用安全性高、无副作用。这些小分子的核桃多肽通过对血管紧张素转化酶(ACE)的活性进行抑制以致使血压降低,对高血压病患可以起到降压作用。本文以核桃脱脂后的副产物核桃粕为研究对象,经蛋白酶水解后制备ACE抑制肽,并对ACE抑制肽混合物进行了初步分离纯化,获得了具有较高降压活性的小分子多肽。本文以核桃为原料进行研究,分析了核桃仁中主要的基本营养成分,包括蛋白质、水分、灰分、油脂、还原糖。将核桃去皮压榨脱脂后,对比了不同的提取方法,确定以超声波辅助-碱溶酸沉法提取蛋白质的工艺最优。通过响应面法,得到最佳提取条件:液料比40:1(m L/g)、Na OH浓度0.08%、提取温度58℃、时间110min。在此条件下,核桃蛋白提取率(Y)达到最大,为55.46%。以水解度和ACE抑制率为评价指标,采用不同蛋白酶酶解核桃蛋白,结果表明碱性蛋白酶作用最佳。采用响应面法进行优化其制备工艺,得出碱性蛋白酶酶解制备ACE抑制肽的最佳条件为:温度:54℃、p H:9、加酶量:7300 U/g、底物浓度:2.2%。该条件下的ACE抑制率为61.03%。采用分子截留量为10KDa和3KDa的超滤膜对核桃蛋白水解液进行超滤分离,得到分子量为小于3KDa、310KDa、大于10KDa三个组分,IC50值分别为0.3893 mg/m L、0.9939 mg/m L、5.9939 mg/m L,其中分子量小于3KDa的IC50值最低。将超滤所得的分子量小于3KDa的ACE抑制肽凝胶层析,得到峰1、峰2、峰3三个波峰。其ACE抑制率分别为54.28%,80.92%、68.49%,其中峰2的ACE抑制率最高,达到了80.92%,对峰2组分进行冷冻干燥,得到较高活性的ACE抑制肽。
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