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目的:我们首先建立银屑病诱发的慢性瘙痒小鼠模型,检测银屑病小鼠的自发痒和触诱发痒,并确定模型的稳定性和病理学特征,同时探究银屑病小鼠模型中精胺和亚精胺的含量变化以及多胺合成代谢基因的表达情况;然后在银屑病小鼠模型中,采用药理学、行为学和组织学技术手段,通过阻断多胺合成、损毁C纤维、和肥大细胞脱颗粒来探究银屑病小鼠自发痒和触诱发痒与多胺之间的关系;最后,在HEK293细胞中采用药理学、分子生物学和活细胞成像等方法来探究多胺引发瘙痒的分子机制。方法:(1)将ICR小鼠随机分为两组,一组涂抹咪喹莫特乳膏(PSO组),另外一组仅做脱毛处理,不涂抹药物(CON组),每组5-9只。应用荧光定量PCR、HE染色和甲苯胺蓝染色等技术,检测银屑病小鼠皮肤中角质细胞增殖、肥大细胞迁移和相关炎症因子表达,确定模型的病理学变化特征和炎症因子变化情况。在造模过程中,分别在固定的时间点上,采用触诱发痒和自发痒的检测方法研究涂抹咪喹莫特乳膏后小鼠的抓挠反应;应用荧光定量PCR检测小鼠DRG中多胺合成和代谢相关基因的表达情况,同时应用免疫荧光法检测精胺和亚精胺在皮肤组织中的表达变化。(2)在银屑病造模前给予超强辣椒素(RTX,30μg/kg、70 μg/kg、100 μg/kg)、compound 48/80(25 μg/200 g、60 μg/200 g、125 μg/200 g、200 μg/200 g)和 DFMO(0.5%)处理,然后比较模型组和处理组间的自发痒、触诱发痒和病理学特征。(3)应用荧光定量PCR技术,检测造模过程中TRPA1、TRPV1和Cav3.2的mRNA表达情况。(4)将ICR小鼠随机分组,在小鼠的颈部通过皮内注射分别给予小鼠精胺(100-1200μg)、亚精胺(50-300μ咫)和腐胺(50-500μg),每组6-8只,确定多胺诱发抓挠行为的合适剂量。然后将ICR小鼠随机分组,给小鼠的脸颊分别注射精胺(500μg)、亚精胺(200μg)和腐胺(200μg),每组5-6只;同时分别在颈部注射多胺之前给予吗啡(10mg/kg)和纳洛酮(10mg/kg)处理,每组5-6只,应用行为学方法,确定多胺能够诱发小鼠瘙痒反应。(5)采用药理学方法,分别给小鼠提前注射RTX、compound48/80、组胺受体拮抗剂扑尔敏(1mg/kg)、TRPV1阻断剂(CPZ)、TRPA1阻断剂(HC030031)和谷氨酸受体拮抗剂(CNQX、MK801),探究多胺诱发瘙痒的分子机制。(6)采用体外培养HEK-293细胞系,分别转染TRPA1和TRPV1质粒,然后应用酶标仪和活细胞工作站,检测胞内钙的浓度,分别确定三种多胺对TRPAI和TRPV1的作用。(7)将ICR小鼠随机分组,在小鼠颈部分别注射精胺(500μg)、亚精胺(200 Hg)和腐胺(200μg),5 min内取小鼠背侧脊髓和DRG组织,并应用蛋白免疫印记法检测注射多胺后ERK的磷酸化情况;同时应用药理学手段,给小鼠提前鞘内注射MEK的抑制剂U0126(1 nmol),通过行为学检测,观察小鼠的搔抓反应,确定多胺诱发瘙痒和p-ERK之间的关系。结果:(1)涂抹咪喹莫特乳膏后,小鼠出现银屑病病理学特征:炎症因子表达显著升高和皮肤角质细胞显著增殖。银屑病小鼠(PSO组)出现明显的抓挠反应,且存在显著的触诱发痒。(2)涂抹咪喹莫特乳膏后,荧光定量PCR结果显示银屑病小鼠(PSO组)的多胺合成和代谢基因显著改变,并且免疫荧光结果显示PSO组小鼠皮肤中精胺和亚精胺的含量显著增加。同时给予DFMO、compound 48/80和RTX处理后能够显著降低银屑病诱发的瘙痒。(3)在脸颊模型和吗啡、纳洛酮实验中,三种多胺能够诱发瘙痒,并且在颈背部模型中,搔抓次数呈剂量依赖性。注射多胺可以显著引发触诱发痒。(4)药理学实验结果显示,RTX、compound48/80以及TRPA1和TRPV1的拮抗剂能够显著的抑制多胺诱发的瘙痒,而组胺受体拮抗剂和谷氨酸受体拮抗剂不能改变多胺诱发的瘙痒。(5)活细胞工作站和酶标仪检测结果显示,多胺能够显著增加转染TRPA1和TRPV1的HEK-293细胞中钙浓度。(6)药理学实验显示,U0126能够显著抑制多胺诱发的瘙痒,同时Western blotting结果显示,多胺能够显著诱发脊髓中p-ERK的表达,而不影响DRG中p-ERK的表达,表明p-ERK参与了多胺诱发的瘙痒。结论:(1)银屑病小鼠存在显著的自发痒和触诱发痒。(2)多胺参与了银屑病诱发的瘙痒。(3)多胺通过激活TRPA1和TRPV1通道介导钙离子内流,引起p-ERK表达,从而诱发瘙痒。