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目的:探讨高血糖加重脑缺血再灌注损伤及其可能的机制;探讨枸杞多糖减轻高血糖加重脑缺血再灌注损伤的作用及Wnt/β-catenin信号通路的变化特点。方法:实验动物随机分为正常血糖组(NG),高血糖组(HG),枸杞多糖干预组(LBP),根据处理方式及缺血再灌注时间点不同,每组又分为假手术组(Sham)、缺血再灌注1-、3-、7-d四个亚组。采用一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立高血糖模型,在高血糖成模后,给予大鼠枸杞多糖(LBP)腹腔注射预处理4周,期间监测体重值、血糖值。后采用线栓法制造大脑中动脉栓塞(MCAO)再灌注模型,在不同的再灌注时间点,检测大鼠的神经功能缺损情况、生存率、梗死体积、血脑屏障通透性、组织学变化、凋亡情况、神经元超微结构。应用免疫组织化学和Western blot技术检测大鼠脑缺血半暗带皮质区神经血管单元构筑各组分:神经元核抗原(NeuN)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、IV型胶原蛋白(CollagenIV)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达变化和血脑屏障相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5的表达变化;免疫荧光技术检测微血管密度计数的变化;免疫荧光双标和免疫荧光三标技术观察神经血管单元的整体结构变化;透射电子显微镜观察脑微小血管超微结构的变化。应用Western blot和免疫荧光技术检测大鼠脑缺血半暗带皮质区Wnt/β-catenin信号通路关键因子:Wnt3a、β-catenin、p-GSK-3β和GSK-3β的表达变化。HT22细胞高糖缺氧复氧培养模拟在体高血糖脑缺血再灌注状态,实验细胞分为正常糖组(NG),高渗组,正常糖缺氧组(NG+OD),高糖缺氧组(HG+OD),高糖缺氧枸杞多糖干预组(HG+OD+LBP),高糖缺氧LiCl干预组(HG+OD+LiCl),高糖缺氧LiCl和LBP共同干预组(HG+OD+LiCl+LBP)。应用MTT法检测细胞活性,二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)法检测活性氧(ROS)的产生量,Western blot和免疫荧光技术检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键因子:β-catenin、p-GSK-3β和GSK-3β的表达情况。结果:体重值在给予STZ后3天、1周、2周、3周、4周各个时间点HG组都低于NG组(P<0.05),LBP组与HG组比较无统计学意义。血糖值在给予STZ后3天、1周、2周、3周、4周各个时间点HG组都高于NG组(P<0.05),3周、4周两个时间点LBP组低于HG组(P<0.05)。神经功能缺损评分在MCAO造模成功后缺血再灌注0d、1d、3d、7d各个时间点,HG组都高于NG组(P<0.05),LBP组都低于HG组(P<0.05),但仍然高于NG组(P<0.05)。生存率在缺血再灌注3d与7d时,HG组低于NG组(P<0.05),LBP组高于HG组(P<0.05)。梗死体积HG组明显大于NG组(P<0.01),LBP组明显小于HG组(P<0.01)。血脑屏障IgG渗出量HG组明显多于NG组(P<0.01),LBP组明显少于HG组(P<0.01)。核固缩神经元数量HG组高于NG组(P<0.05),LBP组低于HG组(P<0.05)。凋亡细胞比率HG组明显高于NG组(P<0.01),LBP组明显低于HG组(P<0.01)。HE染色、尼氏染色和电镜结果都显示:HG组比NG组有更为严重的形态学改变,LBP组形态学改变比HG组轻。神经元核抗原(NeuN)的表达量在缺血再灌注1d、3d、7d三个时间点,HG组均低于NG组(P<0.05或P<0.01),LBP组均高于HG组(P<0.01或P<0.05);随再灌注时间的延长,NeuN表达量NG组呈升高趋势(P<0.05),HG组和LBP组呈下降趋势(P<0.05)。胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达量在缺血再灌注1d,3d时,HG组低于NG组(P<0.05,P<0.01),3d时,LBP组高于HG组(P<0.05),7d时,HG组高于NG组(P<0.01),LBP组低于HG组(P<0.05);随再灌注时间的延长,GFAP的表达量NG组先升高后降低(P<0.01);HG组和LBP组呈升高趋势(P<0.05或P<0.01)。IV型胶原蛋白(CollagenIV)的表达量在缺血再灌注1d、3d、7d三个时间点,HG组均低于NG组(P<0.01或P<0.05),LBP组均高于HG组(P<0.05);随再灌注时间的延长,CollagenIV的表达量NG组、HG组、LBP组三组均呈升高趋势(P<0.05或P<0.01)。血管内皮生长因子(VEGF)的表达量在缺血再灌注1d时,HG组高于NG组(P<0.01),3d、7d时,HG组低于NG组(P<0.05,P<0.01),3d时LBP组高于HG组(P<0.05);随再灌注时间的延长,VEGF的表达量NG组呈升高趋势(P<0.05或P<0.01),HG组和LBP组呈下降趋势(P<0.05)。微血管数目HG组明显少于NG组(P<0.01),LBP组多于HG组(P<0.05)。血管分离指数HG组明显高于NG组(P<0.01),LBP组明显低于HG组(P<0.01)。Occludin与Claudin-5的表达量HG组低于NG组(P<0.05)。ZO-1、Occludin和Claudin-5的表达量LBP组均高于HG组(P<0.01或P<0.05)。免疫荧光三标结果可见神经血管单元的整体结构紊乱程度HG组高于NG组,LBP组低于HG组;透射电子显微镜可见脑微小血管超微结构异常程度HG组高于NG组,LBP组低于HG组。Wnt3a的表达量在缺血再灌注1d、3d、7d三个时间点,HG组均低于NG组(P<0.05或P<0.01),LBP组均高于HG组(P<0.01)。β-catenin的表达量在缺血再灌注1d、3d时HG组低于NG组(P<0.05);1d、3d、7d三个时间点,LBP组均高于HG组(P<0.05或P<0.01)。p-GSK-3β的表达量在缺血再灌注1d时,HG组低于NG组(P<0.01),LBP组高于HG组(P<0.01);3d时,HG组高于NG组(P<0.01),LBP组低于HG组(P<0.05);7d时,HG组高于NG组(P<0.05),LBP组高于HG组(P<0.05)。GSK-3β的表达量在缺血再灌注1d时,LBP组高于HG组(P<0.05);3d时,HG组低于NG组(P<0.05),LBP组高于HG组(P<0.01);7d时,HG组高于NG组(P<0.05),LBP组低于HG组(P<0.05)。β-catenin主要表达于神经元。细胞活性HG+OD组低于NG+OD组(P<0.01),HG+OD+LBP组高于HG+OD组(P<0.01或P<0.05)。活性氧(ROS)的产生量HG+OD组高于NG+OD组(P<0.05),HG+OD+LBP组低于HG+OD组(P<0.05)。β-catenin的表达量HG+OD组低于NG+OD组(P<0.05);HG+OD+LiCl组、HG+OD+LBP组、HG+OD+LiCl+LBP组均高于HG+OD组(P<0.05)。p-GSK-3β的表达量HG+OD组低于NG+OD组(P<0.05),HG+OD+LBP组明显高于HG+OD组(P<0.01)。GSK-3β的表达量HG+OD+LBP组明显低于HG+OD组(P<0.01)。结论:高血糖加重脑缺血再灌注损伤,高血糖通过损伤神经血管单元加重脑缺血再灌注损伤;高血糖加重脑缺血再灌注神经血管单元损伤涉及Wnt信号通路的抑制;枸杞多糖通过保护神经血管单元缓解高血糖加重的脑缺血再灌注损伤,该保护作用可能与枸杞多糖激活Wnt/β-catenin信号通路有关。