苍术为菊科苍术属植物苍术(Atractylodes lancea(Thunb)DC.)的干燥根茎。功效燥湿健脾,祛风散寒,明目。适用于脘腹胀满,泄泻,水肿,风湿痹痛,风寒感冒,雀目夜盲等症。作为一个具有极大多型性的种,苍术种内化学型的划分极其混乱。苍术炮制研究已取得了大量成果,但由于相关研究在试验设计或思路方法上仍有一定局限,造成人们至今无法全面认识炮制影响苍术的规律性,也没有真正阐明炮制对苍术的影响。具体存在以下问题:1)多数研究都是单样品炮制前后进行比较,由于样品没有重复,无法进行统计分析;2)多数研究采用了混合取样,这一做法也掩盖了每个个体在炮制前后的变化趋势,导致无法真正观察炮制对苍术组分造成的影响;3)相关研究普遍停留在试验研究的水平上,人们对苍术炮制的意义至今停留在“去油去燥”这一降低副作用的理论上,缺少理论创新。一、内容和方法针对以上苍术炮制中存在的问题,本论文主要开展了以下二个部分的研究:(一)麸炒对非道地苍术挥发油的影响及其与道地性的关系(二)麸炒对道地苍术挥发油的影响及其与道地性的关系方法如下:在前期对苍术道地性研究和苍术炮制文献研究的基础上,提出以下的假说:即苍术炮制后挥发油成分更加接近道地药材。并以此假说为基础,针对以上苍术炮制中存在的问题,按照《中国药典》规定的麸炒炮制方法,首次采用分单株大量取样的方法对苍术进行炮制研究,在保证同一个实验研究背景一致的条件下,利用GC-MS联用技术结合现代统计学,分析麸炒后苍术挥发油成分的变化规律,并以道地药材特征为依据,研究炮制对苍术质量的影响。二、结果(一)非道地苍术1、总挥发油及组分鉴别:麸炒后挥发油总含量显著降低。麸炒前共分离出25种成分,鉴定了18种,占挥发油相对含量的96.1%;麸炒品中分离出30种成分,鉴定了25种,占挥发油相对含量的96.4%。麸炒前后共有成分18种,炮制后新增加组分7种。2、成分总数目变化:发现炮制前后苍术挥发油总组分数目发生较大变化,但未出现明显规律性,虽然挥发油组分平均总数增加了,但未达到显著水平。麸炒前后苍术挥发油归一化百分含量大于1%的成分数目的均数分别为5.3个和8.5个,麸炒后显著高于麸炒前。3、含量变化:比较了所鉴定的25个组分炮制前后的变化,相关分析显示炮制前后每个苍术个体挥发油组分显著相关,成对t检验显示炮制前后的差异不显著;而统计报表分析显示,10个苍术样品,炮制后挥发油组分的标准差和标准误均小于炮制前,提示麸炒会导致苍术各挥发油组分含量趋于均衡,即含量小的组分变大,含量大的组分变小。对鉴定出的25种成分进行了比较,其中7种组分在麸炒后显著高于麸炒前(P<0.05);9种组分在麸炒前后无显著性差异(P>0.05)。2种组分在麸炒后含量显著低于麸炒前(P<0.05);麸炒前未检出,麸炒后新增加的组分有7种。(二)道地苍术1、总挥发油含量及组分鉴别:炮制后总挥发油含量显著降低。炮制前鉴定出组分共31个。炮制后鉴定出组分36个;炮制前后共有组分26个;炮制后独有组分10个;炮制前独有组分5个。2、成分总数目变化:炮制前后苍术挥发油组分数目的t检验比较显示,苍术炮制后,挥发油组分数量由平均107个组分变为平均126个组分,组分数目显著增高。3、含量变化:对炮制前后挥发油中含量最大的三个峰进行了比较,发现炮制后,榄香油醇频率降低,由4次变为3次;桉叶醇在苍术三个最大的峰中出现的频率降低,由5次变为2次;苍术酮没有变化;苍术素出现频率增加,由8次变为10次;芹烷二烯酮的频率增加,由6次变为8次。选择归一化百分含量大于1%的20个化合物,比较其炮制前后含量的变化,相关分析显示炮制前后每个苍术个体挥发油组分显著相关;成对t检验显示炮制前后的差异不显著;但统计报表分析显示,10个苍术样品,炮制后有9个样品挥发油组分的标准差小于炮制前,只有样品10的标准差大于炮制前,提示麸炒苍术会导致苍术各挥发油组分含量趋于均衡。对苍术挥发油中20个归一化百分含量大于1%的组分进行单因子方差分析,结果显示,炮制后9个组分含量上升,共10个组分含量下降,1个组分含量不变。其中,组分1、2、4含量上升达到显著水平,组分14、18、19含量下降达到显著水平。其中苍术挥发油组分中含量最大的6个组分,苍术酮、苍术素、榄香醇、茅术醇、桉叶醇、芹烷二烯酮,苍术酮、苍术素、榄香醇、芹烷二烯酮含量稳定,炮制前后归一化百分含量的变化幅度均小于5%,茅术醇、桉叶醇含量分别降低59%和18%。三、结论(一)道地苍术与非道地苍术挥发油组成有明显差异非道地苍术与道地苍术挥发油组成差异很大,前者峰的数目较少,平均72个,挥发油中含量最大的两个峰为茅术醇、β-桉叶醇;而后者挥发油组分数目较多,平均107个,其中含量较大的峰也较多,主要包括苍术酮、苍术素、榄香醇、茅术醇、桉叶醇、芹烷二烯酮。(二)道地苍术与非道地苍术炮制后依旧呈现不同的特征就个体水平而言,每个道地苍术与非道地苍术挥发油组分在炮制前后均显著相关,变化不显著;就群体水平而言,道地和非道地苍术所呈现的差异与炮制前相同:即前者峰的数目较少,平均90个,挥发油中含量最大的两个峰仍为茅术醇、β-桉叶醇;而后者挥发油组分数目较多,平均126个,其中含量较大的峰也较多,主要包括苍术酮、苍术素、榄香醇、茅术醇、桉叶醇、芹烷二烯酮。(三)道地苍术与非道地苍术炮制后挥发油含量及组分发生相似的规律性改变道地苍术与非道地苍术挥发油组分炮制前后呈现出一定共同的规律性;1)如炮制后总挥发油含量均有显著下降。二者的挥发油中组分的数目在炮制后均出现上升趋势,道地苍术由平均107个组分变为126个组分,非道地苍术由平均72个组分变为90个组分,前者达到显著水平;2)炮制后道地和非道地苍术个体中挥发油组分的方差减少,显示炮制后苍术挥发油组分中归一化百分含量较大的组分有降低的趋势,而归一化百分含量较小的组分有增加的趋势,即炮制后各组分含量趋于均衡;3)炮制后,道地和非道地苍术挥发油中的β-桉叶醇和茅术醇均呈现下降趋势,这似乎是中医认为麸炒苍术去“燥”的物质基础。(四)炮制后苍术更接近道地药材本课题组前期研究发现,道地苍术挥发油成分较非道地产区苍术有很大差异,其中总挥发油含量低,β-桉叶醇、茅术醇含量低及挥发油组分数目多是其显著特点。本试验研究发现苍术经过炮制后,总挥发油含量显著低,尤其是β-桉叶醇、茅术醇含量降低,挥发油组分数目显著增多,更能体现道地药材的特点。郭兰萍等分析指出,茅苍术的道地性表现在临床上包含两个方面的作用,一是补气健脾之功似白术,二是燥湿之功同于其它南苍术,既能燥湿又能健脾的特点是茅山苍术成为道地药材的主要原因。由此认为麸炒后苍术显示出较强的健脾功效,也间接支持苍术麸炒后更加接近道地药材。(五)苍术炮制品质量标准的确定挥发油被认为是苍术的主要药理活性成分,也是其发挥临床疗效的重要物质基础。大量研究表明,苍术挥发油中β-桉叶醇、茅术醇具有显著的药理活性,因而这两个组分经常被用于苍术的质量标准。但本研究发现,炮制后苍术挥发油含量显著降低,而且β-桉叶醇、茅术醇含量都有较大程度的下降。更有趣的是,发现炮制后挥发油组分的标准差和标准误均小于炮制前,即麸炒苍术会导致苍术各挥发油组分含量趋于均衡,即含量小的组分变大,含量大的组分变小。这些均提示,以挥发油中一个或几个成分含量不足以全面衡量苍术炮制品质量。道地药材是公认的质优效佳的药材,是优质药材的代名词。本研究发现,炮制后苍术较炮制前苍术更能体现道地药材的特征,这一研究结果,为用道地药材标准来探讨苍术炮制品质量标准提供了思路。