【摘 要】
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本课题系统收集了海南岛热带原始雨林区土壤样品1643份,建立了一个拥有3152份芽孢杆菌的菌株库,分离出苏云金芽孢杆菌野生菌株176株,菌株的分离率和出菌率为5.58%和10.71%。其中五
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本课题系统收集了海南岛热带原始雨林区土壤样品1643份,建立了一个拥有3152份芽孢杆菌的菌株库,分离出苏云金芽孢杆菌野生菌株176株,菌株的分离率和出菌率为5.58%和10.71%。其中五指山热带原始雨林区出菌率最高,霸王岭最低,分别为14.54%和4.47%。原因是五指山山系大,是我国原生态保持得最好,没有人为破坏的热带原始雨林区,植被覆盖率高,土壤地表腐殖质层厚,而且昆虫种类和数量多。霸王岭热带原始雨林区出菌率和分离率较低,与霸王岭山体坡度陡峭,土壤被雨水冲刷,土壤沙化严重,腐殖质含量低密切相关。分析不同海拔苏云金芽孢杆菌分布律,发现Bt菌分布与海拔表现一定规律,一般海拔800-1400米Bt菌含量高。海拔小于800米的地区一般农林生产活动频繁,破坏植被和土壤结构,影响土壤微生态环境;一般随着海拔升高土壤植被覆盖率相应的降低,尤其土壤腐殖质含量明显降低,土壤沙化严重,结构松散,不利于Bt菌株生长繁殖。对部分菌株进行了16S rDNA序列分析鉴定和生长特性观察,通过显微镜观察到分离的苏云金芽孢杆菌的伴孢晶体类型有菱形、方形、圆形、椭圆形等,其中圆形晶体比例较高。为了鉴定分离菌株含有的杀虫晶体蛋白基因的类型,设计了47对基因鉴定的通用引物,利用PCR-RFLP方法鉴定分离的Bt菌株包含的杀虫晶体蛋白基因型,结果初步表明137株Bt菌含有cry1基因,38株含有cry2基因,分别表达130kDa和60kDa晶体蛋白,晶体为菱形;6株含有cry3基因,表达70kDa晶体蛋白,晶体呈方形;21株含有cry8基因,表达130kDa晶体蛋白,圆形晶体;8株含有cry4和cry11基因,表达130kDa或80kDa晶体蛋白,晶体也为菱形。对高产晶体蛋白菌株4b-1的cry1Ac基因进行了部分克隆,表明该菌株含有cry1Ac基因,可能对鳞翅目昆虫有高毒力。
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