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目的：1、通过一种无血清培养法培养高纯度的背根神经节神经细胞,为神经系统疾病的实验研究奠定基础。2、通过应用iloprost对培养的背根神经节神经细胞进行干预,观察iloprost对神经细胞轴突生长能力的影响。3、应用iloprost对培养的背根神经节神经细胞进行干预,观察其对阿霉素诱导的细胞凋亡的作用,为临床的慢性脊髓损伤后的修复研究寻求新的方法。方法：1、选取新生24小时内SD乳鼠作为取材对象,显微镜下取出背根神经节,0.25%的胰酶进行消化,接种在0.2mg/ml多聚赖氨酸包被处理的培养板内,用含浓度为100μ g/ml神经生长因子(NGF)、2%B27添加剂、0.1mg/mlL谷氨酰胺,1%青链霉素的Nuerobasal培养基培养,培养48小时后全量换液,用含5μ mol/L阿糖胞苷的培养基进行纯化培养48小时,此后每2天全量换液,取培养第5天的DRG细胞进行NSE免疫组织化学染色进行细胞鉴定。2、将取出的背根神经节进行不同的处理后,分别进行组织块培养和悬浮细胞培养。组织块培养：将DRG用0.25%胰蛋白酶消化5分钟,制均匀的组织块,分散接种在用多聚赖氨酸包被处理的6孔塑料细胞培养板中,然后分成A组和B组培养,A组应用含iloprost终浓度为20ng/ml的培养基培养,B组用不含iloprost的培养基培养,观察比较两组第3、5天时组织块周围突起数量、突起长度及最长突起长度。细胞培养：按照方法1中的步骤进行DRG取材、接种,然后分成C组和D组培养,C组应用含iloprost终浓度为20ng/ml的培养基培养,D组用不含iloprost的培养基培养,观察比较两组第3、5、11天时细胞突起数量、突起长度及最长突起长度。3、按照方法1中的步骤进行DRG取材、接种,然后分成A、B和C三组培养,A组按方法1中步骤培养,B组用不含iloprost的培养基培养,C组用含iloprost终浓度为20ng/ml的培养基培养。用配置好的含阿霉素(ADM)终浓度为5mg/L的反应液对培养5天后的B组和C组细胞进行损伤处理4h。对三组进行TUNEL染色处理,显微镜下观察细胞凋亡情况,计算细胞凋亡率。结果：1、悬液细胞主要以神经细胞、雪旺细胞和成纤维细胞为主。刚接种的细胞均呈圆形,4h后细胞即开始贴壁,培养24h,可见大部分细胞贴壁牢固,细胞开始长出突起,突起细长,并可观察到突起末端的生长锥。用含阿糖胞苷的培养基培养48小时后,可见细胞数目明显减少,但神经细胞突起的主干和分枝明显延长并增粗,神经突起网络变得更加稠密,神经细胞胞体逐渐增大,细胞从球形变为多种形态后,形态保持相对稳定。细胞免疫组织化学染色显示,显色细胞大部分为阳性细胞,细胞质被染成棕黄色。纯度检测结果显示,培养7天后的神经细胞纯度可达90%左右。2、在组织块培养的第3、5天,iloprost干预组(A组)中组织块周围突起数目、突起长度和最长突起长度均较非干预组(B组)有明显增长,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。在细胞培养的第3、5、11天,iloprost干预组(C组)中细胞突起数目、平均突起长度和最长突起长度均较非干预组(D组)有明显增长,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。3、在A、B、C三组中均可发现不同程度的细胞凋亡现象,在无iloprost处理组(B组)中细胞凋亡现象最明显,细胞凋亡率最高(62.81±5.04)%,C组凋亡率次之(54.78±5.12)%,A组凋亡率最低(0.44±0.03)%；ADM处理组(B和C组)细胞凋亡率与非ADM处理组(A组)比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。iloprost干预组(C)细胞凋亡率与非iloprost干预组(B组)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：1、通过对24小时新生SD乳鼠取材,采用无血清培养基培养,培养48小时加入阿糖胞苷的方法可明显抑制非神经细胞的生长,获得高纯度的DRG神经细胞。2、前列环素能够提高组织块及培养细胞轴突的生长能力,其对神经细胞的作用,不仅仅是改变局部血流,增加局部神经营养因子,而且本身还是一种神经营养因子。它通过与细胞膜上相应受体结合,提高细胞内cAMP水平,从而激活一系列生化反应,促进轴突的生长。3、通过浓度为5mg/L阿霉素(ADM)反应液损伤处理4h可诱导背根神经节细胞凋亡,前列环素可抑制细胞凋亡,可能通过升高cAMP后激活CREB,上调BcL-2途径而抑制凋亡